1. 摘取眼球,用200IU/ml的庆大霉素心理盐水浸泡消毒5min。沿锯齿缘后2—3mm处环形剪开眼球前段,去除角膜、晶状体以及玻璃体。分手去掉视网膜神经上皮层。将眼球后段制成眼杯;
2. 将眼杯置于眼球托(能够洗净消毒过的盐水瓶胶塞替代)上,取持针器用7-0尼龙线个对称标的目的上,把眼杯缝合固定正在眼球托的壁缘上;
4. 插手0.01%EDTA-0.125%胰卵白酶的夹杂消化液,置于无菌的烧杯中。于37℃恒温箱中消化30min;
5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。插手有血清培育液终止消化酶的感化,并用毛细吸管悄悄吹打眼杯内壁,以使视网膜色素上皮细胞零落;
10. 也可间接用机械分手植块法:用无齿镊撕下视网膜色素上皮细胞层,经PBS漂洗后,将其剪成1.5mm×1.5mm大小的组织块,间接接种于24孔培育板进行培育。
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