2、用70%乙醇擦拭腹部，把皮肤向后拉，出腹膜。用消毒过的工具，剪开腹壁以出子宫角。将子宫角移到10cm的皿里。用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。
4、用两副钟表镊子将胎盘和膜与胚胎分离开，分离后切除内脏(所有深色的东西)。将胚胎转移到(有盖)培养皿中，用10ml不含钙镁离子的PBS洗三遍。
5、用带有弯钩的眼科剪将组织剪碎，当你剪的很累以致于不能再剪的时候，加入2ml胰蛋白酶/EDTA继续剪。再加入另外5ml胰蛋白酶/EDTA，并在37℃孵育大约20分钟。此时，返回至第一步，对下一只鼠进行操作。
13、当培养瓶中的细胞长到80-90%汇合时并仍处于指数生长期时，是冻存细胞的最佳时期。一般说来，这发生在准备胚胎的第二天。这可能或早或晚发生，所以请注意观察你的培养瓶。
MEF每传一代就会生长得更慢些。你第一次传代的比例可以是1:5，但是最后一次的传代(第4代或第5代)比例应该是1:2。
10、迅速将细胞转移到冻存的容器中，-70℃冻存过夜。(细胞不能长时间放置在室温而含有DMSO的情况下)
3、当仅还有一点冰晶残留时，用95%的乙醇消毒冻存瓶的外面，并将其置于hood中。(为什么用95%的乙醇消毒?hood是什么?)
5、想管中逐滴加入10ml培养基。这一步操作不能少于两分钟。做快了对细胞将是一种打击，你将得到比其他方法具有更低生活能力的细胞。
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