小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞

　　注： Ficoll-Paque和Lympholyte-M的密度与温度有关;该方法中所采用的以及其他商品化的高密度溶液适合在室温中使用。因此应注意使细胞悬液、离心和高密度溶液控制在室温。否则会因活细胞沉入离心管底导致在密度界面上损失活细胞。

　　1、用RPMI-5完全培养基混悬细胞，分装到离心管中使其细胞数达到0.5×108～1×108个细胞/2ml(12ml离心管)或1×108～5×108个细胞/5ml(50ml离心管)。

　　2、用移液器吸取3ml(使用12ml离心管时)或5ml(使用50ml离心管时)高密度溶液，将枪头伸到离心管底，缓慢将高密度溶液加入细胞悬液下方。

　　3、室温，800g离心15min。为了取得好的分离效果，最好将离心机的“brake”开关关掉。

　　4、使用5ml移液器，沿高密度层表面缓慢移动移液器枪头，吸入漂浮在高密度层上方的活细胞，尽量少收集高密度溶液。将活细胞移入另一管中。

　　5、加入RPMI-5完全培养基(少量细胞加入10ml，细胞量较多时加入40ml)，室温，200g离心10min。重复一次。