正组织源性鼻咽上皮细胞的培养

　　4. 低血清培养液与无血清培养液：基础培养液均为DMEM/F12(1:1，V/V)混合液。配置时，添加1.2g/L NaHCO3及15 mmol/L HEPES。低血清培养液是在基础培养液中再加入5μg/ml胰岛素、5ng/ml表皮生长因子、0.3mg/ml谷氨酰胺、100 IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素、5×10-7 mol/L氢化可的松以及1.25%胎牛血清。若去掉低血清培养液中的胎牛血清，再加1mg/ml牛血清白蛋白及10μg/ml转铁蛋白，即为无血清培养液;

　　1. 取胚龄4—6个月水囊引产的胚胎，在无菌条件下分离鼻咽粘膜。若取材于鼻咽癌活检组织，则须将组织置于含高浓度抗生素(青霉素500 IU/ml、链霉素500μg/ml)的Hanks液中，在4℃下处理1小时;

　　4. 将植块种植到培养瓶内作干贴壁。翻转培养瓶，在瓶中加入2mlRPMI 1640培养液，在37℃培养箱中静置数小时;

　　5. 待植块牢固贴壁后，轻轻翻转培养瓶，使培养液均匀覆盖住植块。在37℃、5%CO2的培养箱中继续培养; 培养24小时后换液，去除未贴壁细胞后继续培养，以后每周换液2—3次;