正常大兔脑微血管内皮细胞的培养

　　1. 通过颈动脉放血将兔处死，去头皮。将头颅取出并浸入75%的乙醇中，消毒约1min。在无菌状态下迅速取出兔大脑皮质。需小心剔除大血管和软脑膜;

　　2. 将脑皮质放入D-Hanks液中，漂洗数次后，将其剪碎。再移入含0.05%胰蛋白酶溶液的小瓶内，在37℃水浴中消化10—20min;

　　3. 用有血清培养液中止消化。置于玻璃研磨器内研磨，制成粗悬液。经孔径为110μm尼龙筛网过滤，将滤液以4000r/min离心10min;

　　4. 弃离心后的上清液。给沉淀加入15%右旋糖苷溶液，重新悬浮沉淀。然后，再以4000r/min离心20min。收集微血管片段;

　　7. 24h后换液，将未贴壁的微血管段移入其它培养瓶或皿中继续贴壁生长。之后，每3d换液一次，待细胞长至融合状态时，即可进行传代培养。