原代细胞DNA与RNA的吖啶橙荧光染色法

　　吖啶橙(acridine orange，AO)是一种常用荧光染料，吖啶橙与原代细胞内的DNA、RNA都有亲和力，但有一定的性，即结合后发不同颜色的荧光，DNA呈亮绿色，而RNA呈橘红色至火红色。此法简便快捷，既可染活原代细胞又可染固定原代细胞。用于直接染色观察活原代细胞或固定染色观察原代细胞均可。吖啶橙对活原代细胞毒性小，配成1×10-4—2×10-4可用于直接染色活原代细胞和进行荧光显微镜观察，但不持久，用固定染色观察法效果更好。

　　1. 将盖片单层培养原代细胞从瓶中取出，立即用温Hanks液漂洗3—5s，以去除培养基中血清;

　　2. 投入95%乙醇或乙酸/甲醇固定15—30min，用滤纸接触盖片边缘，盖片微干;

　　8. 注意事项：观察中应随时填加PBS以避免标本干涸。如用油浸镜观察，需再覆以大盖片盖在附有原代细胞盖片上，原代细胞面朝上，用无荧光性油浸镜观察。原代细胞盖片标本在95%乙醇中能保存数日后仍可观察，如退色，再用AO染色。镜下观察，DNA呈翠绿色，RNA呈火红色。