牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法

　　1.分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml的PBS平皿中，纵向切开血管壁，内皮朝上，用PBS冲洗3次。

　　2.在另一平皿中加入少量0.1%Ⅰ型胶原酶溶液。37℃下消化5-10min，然后加入培养液终止消化。

　　3.刮取内皮细胞。用刮刀轻轻刮内膜表面，刮刀与血管表面成60°，刮刀要轻而均匀地推进。不可刮得过深，也不要刮到血管的边缘处，以免成纤维细胞被污染。

　　4.将刮下的内皮细胞悬液浮于培养液中，1000r/min，离心10min。吸去上清;再加入15ml培养液，用滴灌轻轻吹打，以便分散细胞团，再离心1次，并吸去上清。加入5ml培养液悬浮细胞，制备细胞悬液。