正常关节软骨细胞的短期培养

　　1.软骨细胞来源：动物材料可选用未成年兔的膝关节、鸡胚胸软骨。人体材料可取自引产胎儿或成年人手术切除的软骨标本;

　　1.用手术刀片从关节表面削下软骨组织片，收集在PBS中。反复清洗除去软骨片表面的血液以及可能误带的滑膜组织。新鲜软骨呈乳白浅蓝色、半透明状，略具弹性;

　　3.按组织块与消化液的体积比例为1：10的量加入消化液，置于37℃水浴中轻微振荡消化5h以上，直至软骨组织块基本消失、溶液变浑浊为止。或采用分阶段消化法。即每消化1h就过滤、离心1次，将分离后的软骨细胞立即放入培养液中保存起来，这样反复进行，直至所有软骨组织块消化完全;

　　9.细胞长满瓶壁后，即可传代。届时，用PBS清洗培养物，加入0.125%胰蛋白酶溶液，37℃下消化。镜下观察可见大部分细胞间基质溶解消失。当细胞变圆时，小心倾出含酶液，加入培养液，吹打分散细胞;