3. 消化液:2mg/ml胶原酶溶液。用DMEM培养液配制,并加入牛血清白蛋白20mg/ml;
② 将含有细胞和组织块的消化液倒入加有培养液a的烧杯中,用吸管反复吹打。然后通过孔径为25μm的尼龙网筛。分别收集滤液和未滤过的组织块;
③ 将滤液以600g离心5min,弃上清液。在管中加入培养液b,制成SV细胞悬液,暂存入4℃冰箱中;
④ 合并两次制备所获的SV细胞悬液。用吸管吹打混匀。取少量SV细胞悬液,计数细胞。注意在计数时不要计入血细胞。根据需要调节细胞密度;
① 以104个/cm2的密度将细胞接种于培养皿中,加入培养液b。于37℃、3.5%CO2培养箱中培养12—24h;
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