研究T细胞产生的细胞因子的方法

　　绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在，其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以，在大多数情况下，细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因子的情况。

　　检测细胞因子mRNA的试验主要有：竞争性聚合酶链反应、Northern印迹杂交、斑点杂交、逆聚合酶链反应、原位杂交。

　　(1)用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液培养HT2细胞。取对数生长期细胞，用细胞培养液洗涤细胞2次，每次离心1000×g 10分钟。

　　(2)取96孔细胞培养液，每孔加0.1ml含4×103 HT2细胞的细胞培养液。再加0.1ml T细胞培养上清液或经系列稀释的IL-2标准品，每个稀释度重复3孔。在37℃ 5% CO2的饱和湿度二氧化碳培养箱中培养24小时。

　　(4)用多孔收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，在液体闪烁计数仪中计数每分钟放射活性(cpm)。用cpm对稀释度作图，根据标准曲线判定T细胞培养上清液中IL-2的含量。