正常大兔骨间充质前体细胞的体外成软骨培养

　　1. 在注射器中预先吸入3000U肝素，然后从兔髂骨嵴或胫骨抽吸7—8ml骨髓;

　　3. 在直径为10mm的培养皿中接种2×107个有核细胞。于37℃、5%CO2饱和湿度的CO2培养箱中培养。培养物用完全培养液维持生长14d。每隔4d换液1次;

　　4. 培养至14d，用胰蛋白酶消化培养物，分散细胞。用完全培养液终止胰蛋白酶的作用，收集细胞。计数;

　　5. 以每份5×105个细胞加到15ml聚丙烯圆锥形离心管中。离心(500g，10min)。弃上清液。注意不要分散细胞团块;

　　6. 往离心管小心加入化学限定性培养液，保持细胞团块结构。直接将离心管放到37℃、5%CO2饱和湿度的CO2培养箱中培养。每隔2—3d换液。