人角质形成细胞的分离培养

　　1.取厚1.5mm的皮片，用4℃MEM和HBSS混合液冲洗获取的皮肤材料3次。将皮肤置于培养皿中，用镊子和眼科剪仔细分离皮肤和皮下组织，去除脂肪和疏松结缔组织。

　　2.将皮肤展评，用手术刀切成2-3mm2的小片，放入中性蛋白酶消化液中，4℃下消化15-20h，或37℃下消化2-4h。

　　4.将分离出的表皮块用0.25%胰蛋白酶，在37℃下振荡消化10-20min后，加入含10%胎牛血清的培养基终止消化。

　　5.1500r/min分离心5min，吸去上清液，用培养液重新悬浮沉淀细胞，用吸管轻轻吹散细胞，细胞计数。

　　6.调整细胞密度至1.5×105个/ml，植于塑料培养皿培养，也可与层细胞共同培养。当细胞生长覆盖至培养皿底壁面积的70%-80%时，可进行传代培养。