正常关节软骨细胞的短期培养

  1.用手术刀片从关节表面削下软骨组织片,收集在PBS中。反复清洗除去软骨片表面的血液以及可能误带的滑膜组织。新鲜软骨呈乳白浅蓝色、半透明状,略具弹性;...

正乳腺上皮细胞培养

1. 于产后2-7d收集乳汁。用无菌水擦洗乳房,将乳汁挤入无菌容器。将收集的乳汁混合后,用RPMI1640稀释,以利于离心。...

FITC标记抗体-Chadwick氏法

  离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线.荧光素的准备。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光素计算,称取所需的荧光素量,用3%重碳酸钠水溶液溶解;...

细胞生物学发展史

  1852年病理学家菲尔肖(1821-1902)在研究结缔组织的基础上提出“一切细胞来自细胞”的名言,并且创立了细胞病理学。...

FITC标记抗体-Marsshall氏法

  1.抗体的准备。量取适量已知浓度的球蛋白溶液,置入三角烧瓶中,加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最终球蛋白浓度为20mg/ml,缓冲液容量为总量的1/10,混匀,将三角烧瓶置冰槽中,电磁搅拌速度适当,即以不起泡沫为宜搅拌5—10min;...

甲醇酵母细胞表达系统

此系统不仅具有高表达、高稳定、高分泌的特点,而且其宿主甲醇酵母—巴斯德毕赤酵母(Picchia pastoris)具有高密度生长的特性。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母,主要有H.Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris三种,其中Pichia Pastoris作为基因表达系统使用得最多、最广泛。与以往的基因表达系统相比,它具有无可匹敌的高表达特性,已被认为是最具有发展前景的生产蛋白质的工具之一。因此近年来此表达系统的研究得到迅速发展,在其中表达...

电穿孔和电融合技术

  除了能使细胞膜具有通透性,让的扩散入胞液中以外,高强度的电场脉冲也能引起细胞融合,这一现象叫做电融合。然而,在用电脉冲融合前必须使细胞相互紧密接触,这一电融合方法在原生质融合制取杂交植物,胚胎细胞相互融合制备动物克隆方面非常有用,尤其在制取杂交瘤细胞制备单克隆抗体方面用处很大。几个实验室已证明使用电场电融合效率比常规的化学融合方法高10到100倍,最近,贴壁细胞的电融合还被用来研究细胞融合时细胞的骨架成分和细胞器的动力学重排。...

无菌操作注意事项

  【培养前准备】在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染机会。...

细胞系的建立

  已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系(株)已难胜数,我国也建有百种以上,并在不断增长中。...

磁化细胞分离器分离法(MACS)NK细胞

2. 将单个核细胞的浓度用含10%血清RPMI-1640调整为4×106/ml,加入到无菌的塑料平皿中,37℃,7.5%CO2中培养2h后,除去粘附于塑料的单核细胞和B细胞;...

外周血干细胞移植简介

1979年Goldman等为一组加速期或急变期慢性粒细胞白血病患者移植初诊时采集冻存的外周血细胞,使患者重新回到慢性期,开始了外周血造血干细胞移植(PBSCT)的临床应用。 80年代中期以后,由于细胞分离机性能提高,1990年以后G—CSF应用于PBSC动员获得成功之后,PBSCT得到迅速发展。...

一次性细胞培养皿等标明Tissue Culture Treated是什么意思

  聚苯乙烯透光性能好,具有较好的强度和易塑性,并且没有毒性,成为一次性细胞培养皿和培养板等一次性细胞培养耗材的首选材料(一般的磁带和CD盒也是用聚苯乙烯制成的)。然而聚苯乙烯表面是憎水的,所以需要经过表面的改性处理,变成亲水后才能适用于细胞培养。...

细胞计数及活力测试操作步骤

  在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。...

移液器的正确操作和注意事项

  设定所需要的容量时应调整到大于设定容量值的1/4圈,再调至设定值,这样可排除机械间隙,使设定量值准确,即先将容量调节钮旋转超过目的容量值的1/4圈,再向下调至设定值。...

PriCells: 动物小血管内皮细胞的分离

2. 用细丝线结扎血管的一端,用镊子轻轻夹住结扎侧的末端,用一铁丝将扎住的末端捅进血管内,将血管翻转过来,使内皮细胞面向外。血管另一侧的末端也塞进血管内,用细丝线结扎住,使整个血管仅内皮细胞在外面。...