核酸基因技术--生物岛网

不搞清这7个关键问题,别说你会治「幽门螺杆菌感染」

  专家一致认为生长在胃窦部黏膜内的幽门螺杆菌,符合鉴定传染病病原的Koch,是一种传染病菌,可在人与人之间,现已明确与下列多种疾病的发病有关。...

上海师大与康奈尔大学两校教授联合发布菠菜栽培种基因组草图

  菠菜是重要的叶用蔬菜,含有丰富的类胡萝卜素、叶酸和维生素C等营养物质。菠菜原产于亚洲中部,现已在全球广泛种植,据报道,2014的年产量为2430万吨,我国菠菜产量占世界总产量的89%,是世界上最大的菠菜种植和消费国家。近年来,国内外菠菜的基因组学研究取得一定进展,但关于栽培菠菜的进化、驯化,以及菠菜基因组结构和进化等资料有限。...

质粒提取:质粒实验常见问题分析

  参考见解:这种情况出现的几率较小,常出现在较大质粒或比较特殊的序列中.解决办法:1、降低培养温度,在20~25℃下培养,或室温培养可明显减少发生概率.2、使用一些特殊菌株,如Sure菌株,它缺失了一些重组酶,如rec类等,使得质粒复制更加稳定.3、质粒抽提有一个酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的NaOH浓度过高造成的,请大家注意一下!【有两种方法可以在提质粒前判断菌生长是否正常:1、利用你的嗅觉.只要平时做实验仔细点就能闻出大肠杆菌的气味,新鲜的大肠杆菌是略带一点刺鼻的气味,但不至于反感.而在泥水状的菌液...

Sci Rep:突破!利用CRISPR-Cas9技术开发出帕金森疾病新型筛选工具

  上的研究报告中,来自中佛罗里达大学(University of Central Florida)的研究人员通过研究利用突破性的基因编辑技术开发出了一种帕金森疾病的新型筛查工具,帕金森疾病是一种...

DNA提取与纯化:琼脂糖凝胶中的DNA的回收:DEAE-纤维素膜电泳

  EB-DNA复合物的激发会导致染料的光猝灭以及单链DNA的.用302nm擅长光源取代254nm光源将会降低这两种危害....

质粒提取:质粒的提取

质粒的提取方法很多,大多包括 3 个主要步骤:细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒 DNA的分离和纯化.本实验以碱裂解法为例,介绍质粒的抽提过程....

质粒提取:SDS碱裂解法制备质粒DNA:大量制备

细胞的制备1、挑后的单菌落(或用0.1-1.0ml单菌落的培养物),接种到30ml含有适当抗生素的丰富培养基中(LB、YT或Terrific培养液),于37 ℃剧烈振摇下培养过夜.确保培养物通气良好:试管的体积应该至少比细菌培养液的体积大4倍.试管不宜盖紧培养物应在剧烈振摇下培养.2、在适当的温度和摇速下培养菌液直至对数生长期晚期(OD600约为0.6).3、在含有500mlLB 、YT或Terrific培养液(预热37 ℃)及适当抗生素的烧瓶(2L)中接种25ml对数生长期晚期的菌液.将此培养液在37...

Nature:科学家首次RNA表观修饰在造血干细胞发育中的关键作用

  在脊椎动物中,造血干细胞最初由特化的生血内皮通过内皮-造血(EHT)过程产生于胚胎期主动脉-性腺-中肾区,随后向胎肝(小鼠和人)或尾部造血组织(斑马鱼)迁移并进行扩增,向胸腺迁移以便发育为淋系细胞,最后,向骨髓(小鼠和人)或肾髓(斑马鱼)迁移以维持终生造血。经过几十年的研究与探索,科学家对于造血干细胞的体内发育和体外分化已有了基本了解,但对整个过程的动态调控机制的认识仍不完善,尤其对于表观遗传修饰在脊椎动物造血干细胞发育过程中的作用更是知之甚少。...

质粒提取:层析法纯化质粒DNA

当然,试剂盒的发展也有积极的一面.商家的试剂盒也的确在不断地改进和优化质粒克隆的方法.在过去,小量制备质粒通常采用溴化乙锭 - 氯化铯密度梯度离心的方法.当进行 DNA 操作的酶远没有现在的可靠时,要想得到所需末端的 DNA 片段并与载体连接确实相当困难;获得相当多的阳性重组子不是一件容易的事.并且时由载体本身形成的菌落数与由连接反应获得的菌落数往往几乎一样多.另外含有重组质粒的阳性子通常需通过杂交或繁琐的多次小量制备分析来进行鉴定.过去每分析 100 个菌落以上仅获得一个阳性克隆的情况屡见不鲜.冷泉港实...

DNA提取与纯化:小麦黄化苗总DNA的提取

  疼痛神经元扩大了接触性皮炎和牛皮癣等症状的炎症。尽管它在过敏性和自身免疫性炎症中具有重要性,但是迄今为止尚不知道疼痛神经元是否调节病原体的炎症。免疫学前沿研究中心(IFReC)的科学家发现,Nav1.8离子通道表达的疼痛神经元真菌炎症和骨。...

Cell Rep:研究真菌感染和骨损伤的新机制!

  疼痛神经元扩大了接触性皮炎和牛皮癣等症状的炎症。尽管它在过敏性和自身免疫性炎症中具有重要性,但是迄今为止尚不知道疼痛神经元是否调节病原体的炎症。免疫学前沿研究中心(IFReC)的科学家发现,Nav1.8离子通道表达的疼痛神经元真菌炎症和骨。...

DNA提取与纯化:脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验

为避免大 DNA 在提取过程中断裂,细胞需在琼脂糖凝胶块中进行原位裂解,在本实验中,我们使用金葡萄球菌 (StapHylococcus aureus) 作为例子....

DNA提取与纯化:质粒DNA的提取和纯化中问题的分析讨论

  在提取质粒DNA时,对于小的质粒可用煮沸、碱处理、SDS等剧烈的方法,但较大的质粒易受损,应采用温和裂解法,将细菌悬于蔗糖等渗溶液中,用溶菌酶和EDTA(乙二胺四乙酸)处理,细胞壁和细胞外膜,再加SDS(十二烷基磺酸钠)一类去污剂溶解球形体.要获得大量的质粒DNA关键是裂解寄主细胞.如果寄主细胞没有完全裂解,就会显著降低质粒DNA的回收率.理想状况是是每一个细胞都充分破裂到能使质粒DNA顺利溢出,又没有污染过多的DNA.我们实验时尽量使操作谨慎仔细,使细胞裂解反应温和,以得到清亮的裂解液.但尽管如此,...

DNA提取与纯化:小鼠肝组织DNA的提取

用简单的盐溶液鸡尾酒法洗涤大肠杆菌能够使其处于感受状态,在这种状态下, DNA 可以进入细胞.现在大部分应用于细菌的化学方法都基于 Mandel 和 Higa 的实验结果,他们发现细菌用冰冷的 CaCl2 处理后,在 37 ℃和 42 ℃加热能够被λ噬菌体 DNA 转染.同样的方法随后也被应用于以质粒 DNA 和大肠杆菌染色体 DNA 细菌....

质粒提取:感受态大肠杆菌的制备和

用简单的盐溶液鸡尾酒法洗涤大肠杆菌能够使其处于感受状态,在这种状态下, DNA 可以进入细胞.现在大部分应用于细菌的化学方法都基于 Mandel 和 Higa 的实验结果,他们发现细菌用冰冷的 CaCl2 处理后,在 37 ℃和 42 ℃加热能够被λ噬菌体 DNA 转染.同样的方法随后也被应用于以质粒 DNA 和大肠杆菌染色体 DNA 细菌....