请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50～60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀，我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分，目的蛋白疏水性比较强。...

　　随着现代生物技术的发展,植物基因工程的研究拓宽了植物的使用范围,不仅用于农业,而且延伸到了医药领域,特别是利用转基因植物表达药用蛋白是植物基因工程技术领域引人注目的研究热点之一.转基因植物作为表达药用蛋白的生物反应器,为人类提供了一个更加安全廉价的生产体系.与微生物发酵、动物细胞和转基因动物等生产系统相比,它具有许多优势,例如,植物中不含有潜在的人类病原物,因而使用安全;植物来源广,生产制造简单,可以进行规模化田间种植,生产成本大幅度下降;生物活性蛋白可长期稳定地储存于植物组织或器官中,有利于蛋白的保...

　　微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定.对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况：(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,...

　　大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶....

氢键(hydrogen bond)在稳定蛋白质的结构中起着极其重要的作用.多肽主链上的羰基氧和酰胺氢之间形成的氢键是稳定蛋白质二 级结构的主要作用力.此外,还可在侧链与侧链,侧链与介质水,主链肽基与侧链或主链肽基与水之间形成....

α-螺旋(α-helix)是蛋白质中最常见最典型含量最丰富的二级结构元件.在α螺旋中,每 个螺旋周期包含 3.6 个氨基酸残基,残基侧链伸向外侧,同一肽链上的每个残基的酰胺氢原子和位于它后面的第4个残基上的羰基氧原子之间形成氢键.这种氢键大致与螺旋轴平行.一条多肽链呈α-螺旋构象的推动力就是所有肽键上的酰胺氢和羰基氧之间形成的链内氢键.在水中,肽键上的酰胺氢和羰基氧既能形成内部(α-螺旋内)的氢键,也能与水形成氢键.如果后者发生,多肽链呈现类似变...

16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽,经反复冻融后,会发生集聚,储存液应分装成小份,保存于-20度,每一小份用后应予废弃....

　　肿瘤的发生是多种原因作用的结果,但最终都要涉及及癌基因的表达调控.不同的肿瘤产生时所需要的酶等调控因子不同,选择性小肽作用于肿瘤发生时所需的调控因子等,封闭其活性位点,可防止肿瘤发生.现在已发现很多肿瘤相关基因及肿瘤产生调控因子,筛选与这些靶点结合的多肽,已成为寻找抗癌药物的新热点.美国学者发现了一个小肽(6个氨基酸),它在体内能显著腺癌的生长,包括肺、胃及在大肠腺癌为治疗这一死亡率很高的恶性肿瘤开辟了一条新.科学家发现另外一个小肽(8个氨基酸),它能进入肿瘤细胞,激活抗癌基因P53,肿瘤细胞的凋亡....

1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。...

　　七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白(SCP),有很好的发酵基础,菌体密度可达100g/L干重.其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源,廉价而无毒.它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长,其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30%[1].而在葡萄糖、甘油或乙醇作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX.AOX的合成是在水平调控的.其基因启动子具有明显的调控功能,可用于调控外源基因的表达.此调控作用是由一般碳源/解及碳源特殊又重机...

Paul Berg在他1980年的诺贝尔中说：“毫无疑问,重组DNA技术的应用和发展将我们进入新型药物开发的起点”.2年后,世界上第一个生物技术公司 Genentech推出了她的第一个产品：胰岛素――一种小肽,该公司的研究者成功的将i 工程构建成一个生产胰岛素的工厂.从那以后,科学家们已经发展了各种各样的细胞依赖型或者不依赖细胞型的表达技术.随着蛋白和其它生物药品变得越来越普遍,工业界和学术界的研究者们继续改善表达技术,尤其是表达一些复杂的蛋白,这些蛋白只有磷酸化、糖基化、泛素化和其它一些翻译后修饰后才能...

上样蛋白量30 60 100 ug,4度封闭过夜(包括室温下2h+过夜),一抗室温1h,二抗室温1h, ECL显色结果背景都很深,整个膜都很亮.而目的条带都相对很浅,时间从几s到1min,目的条带都很细.开始考虑是封闭不好的原因,过夜封闭+室温2h还不行....

1.取正混合血清加等量生理盐水,于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50%饱和(NH4)2SO4] (蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质之间聚集而沉淀.加入(NH4)2SO4时要先将其磨成粉末,再缓慢地边搅拌边加入)....

2) 三明治组合后直立站好,准备所要浓度的SDS 胶体溶液如表4.2. 两片0.75mm 厚的平板约需10 mL 分离胶体溶液,以及5 mL 焦集胶体溶液.APS液到最后才加入,未加APS 以前可在真空中抽去溶液中的气体....

2.除去胶面上方的缓冲液,并取出样本 (IEX) 使其回到室温,慢慢用滴管加到亲和胶体上,小心勿弄乱胶体表面;让样本没入胶体中,同时收集流出液每管2.5 mL....