肺腺鳞癌（adnosqumous cell carcinoma, ASC）属于非小细胞肺癌中预后较差的一种，以铂类为基础的化疗药物一直以来都是ASC的主要治疗手段。随着针对肿瘤内基因变异产生的个体治疗方案，例如使用酪氨酸激酶剂或者ALK剂；以及免疫监测点阻断治疗方法的研发，例如近年来FDA在美国批准的程序性死亡因子1（PD-1）抗体药物pembrolizumab，使得非小细胞肺癌（NSCLC）的治疗有了更多的选择用药方案。PD-1以及其配体PD-L1属于免疫监测点蛋白，分别在免疫炎症细胞和肿瘤细胞内表达。在健康的个体内，PD-1和PD-L1参与T细胞活性防止组织自身免疫反应；但由于肿瘤中过表达这些免疫监测点蛋白，可以使肿瘤细胞逃过T细胞的肿瘤杀伤反应。在抗PD-1/PD-L1治疗的临床实验中，病人的无进展期（PFS）和整体期（OS）在使用pembrolizumab治疗NSCLC组均优于单纯使用化疗药物组。与此同时人们发现在未经分类的NSCLC病人中仅约有20%的病人对抗PD-1/PD-L1抗体药物治疗有效。因而在临床上有必要筛选对治疗的病人，一方面可以提高治疗的有效性，另一方面也可以避免非药物类病人接受PD-1/PD-L1治疗后所引起的副作用以及可能出的自身免疫反应。
在这篇文献中，该研究团队通过使用罗氏Ventana的性单克隆抗体（SP263）以及ACD公司的RNAscope原位杂交技术首先检测了87例肺腺鳞癌（ASC）组织样本内的PD-L1 mRNA和蛋白的表达情况。使用IHC检测到的PD-L1表达阳性率为39.22%，使用RNAscope检测到的阳性率为37.25%。两种方法检测结果没有区别（图1）。两者的检测一致性几近完美（κ-coefficient为0.851），统计学分析显示两种方法没有显著性差异（P=1.000）。
接着在对腺鳞癌的腺癌和鳞癌部分进行区分统计分析时，发现PD-L1表达在两者中存在显著性差异（P=0.017）：在腺癌内，PD-L1的表达阳性率为11.11%，在鳞癌部分的阳性率为38.89%。前者与133例肺腺癌中统计得到的PD-L1表达率13.53%相似，而后者与83例肺鳞癌统计得到的PD-L1表达阳性率28.92%相似。
本研究继续对比了腺鳞癌内PD-L1的阳性表达与临床病理特性的关系，结果显示PD-L1的表达与病人性别、年龄、吸烟、肿瘤体积、淋巴结转移、胸膜、复发和死亡无关，但与淋巴血管有显著相关性（P=0.016）。与EGFR，KRAS和ALK突变相比，PD-L1的表达与其没有相关性。
在文章的讨论中，作者阐述了对比使用RNAscope方法检测PD-L1 mRNA以及使用免疫组化方法检测PD-L1蛋白的目的：在临床上存在不同公司提供的特定克隆号的抗体可对病本进行检测，而每个抗体又有各自的cutoff值对结果进行评估。在未来的临床病人筛选过程中，需要一种可以不区分抗体公司抗体克隆号而可定筛查所有病本的检测方法。由于基因经得到mRNA，继而翻译成蛋白质，因而如果能够在mRNA水平对PD-L1进行检测，则将解决这一需求。故首先需要对两者的检测一致性进行分析。本研究之初对比了RNAscope原位杂交方法与IHC免疫组化法在肺腺鳞癌病人标本内测到的PD-L1的表达比率。结果显示两种方法一致性接近100%。这一结果为今后的临床筛选用药病人的检测方法提供了基础的临床数据。
RNAscope技术不但能够进行肿瘤组织中标志物的原位检测，而且在神经生物学上也有着广泛的应用，该技术实现了对大脑组织等神经标本的原位定量和定位分析，结果清晰准确。
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