肌苷为微生物发酵制得的辅酶类药物,有改善机体代谢作用,临床用于各种类型的肝脏疾患、心脏疾患、白 细胞和血小板减少症、中心视网膜炎及视神 经萎缩等.有关标准 [1],注射用肌苷含量测定采用紫外分光光度计,该方法操作复杂、费时且专属性差.为了有效地分离降解产物,准确测定注射用肌苷含量,本文采用高效液相色谱法(HPLC)测定注射用肌苷中肌苷含量,获得满意结果.
肌苷对照品(含量99.2%,中国药品生物制品检定所),注射用肌苷分别为山西(规格：0.3g批号20060101;2006126);海南(规格：0.2g批号20051201).甲醇为色谱纯,试验用水为重蒸馏水.
3 线 对照品储备液的制备 精密称取对照品10.58mg,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀.
3.2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品储备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0ml,分别置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,分别进样20μl,依法测定.以各溶液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制工作标准曲线μg/ml浓度范围内呈现良好的线 精密度试验
取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl注入液相色谱仪,重复进样5次,测定峰面积,结果肌苷峰面积的RSD为0.14%(n=5),表明本法精密度良好.
按供试品溶液制备方法处理同一批号样品5份,测得肌苷的平均含量为105.5%,RSD为1.3%(n=5),表明本法重复性良好.
精密称取已知含量的样品适量(约相当于肌苷50mg),分别精密加入肌苷对照品约40mg、50mg、60mg,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀.精密量取2ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀.按样品含量测定相下方法测定并计算回收率,结果见表1.
取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl分别于0、2、4、6、8、12、24h测定,测得肌苷HPLC峰面积为0.9%,表明溶液在24h内稳定. 表1 回收率测定结果
8.1 对照品溶液的制备 取“3.1”项下对照品储备液5ml置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液.
8.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物,混合均匀,精密称取适量(约相当于肌苷0.1g),置100ml量瓶中,加水约70ml,充分振摇使肌苷溶解,用水稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取2ml,置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀.
8.3 含量测定 精密量取“8.2”项下供试品溶液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,同法测定对照品溶液,按外标法以峰面积计算其含量.结果见表2.表2 样品测定结果
9.1 检测波长的选择 由于肌苷在酸性和高温条件下易分解为次黄嘌呤,且次黄嘌呤在249nm的波长处有最大吸收,肌苷的最大吸收波长为248nm[2],故选择248nm作为检测波长.
9.2 流动相的选择 参考文献[3],并经过实验,选择了甲醇-水(10：90)为流动相,能将杂质(降解产物)与肌苷分离,且分离效果较好,保留时间合适.
最新评论