蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大之一,承担着各种生物功能.蛋自质的定量分析是蛋自质构造分析的基础,也是农牧产品品质分析、食品营养价值比较、生化育种、临床诊断等的重要手段.根据蛋白质的理化性质,提出多种蛋白质定量方法.考马斯亮蓝 G- 250 法是比色法与色素法相结合的复合方法,简便快捷,灵敏度高,稳定性好,是一种较好的常用方法.通过本实验学习考马斯亮蓝 G - 250 法测定蛋白质含量的原理,了解分光光度计的结构、原理和在比色法中的应用.
考马斯亮蓝 G - 250 是一种染料,在游离状态下呈红色,当它与蛋自质结合后变为青色.蛋白质含量在 0 - 1000ug 范围内,蛋白质一色素结合物在 595 nm 下的吸光度与蛋自质含量成正比,故可用比色法测定.
盖上塞子,摇匀.放置 2min 后在 595 nm 波长下比色测定(比色应在 1h 内完成).以牛血清白蛋白含量( ug) 为横坐标,以吸光度为纵坐标,绘出标准曲线、样品中蛋白质含量的测定
( 1 )准确称取约 200mg 绿豆芽下胚轴,放入研钵中,加入 5ml 蒸馏水在冰浴中研成匀浆,离心 (4000r/min, 10min), 将上清液倒入 loml 容量瓶,再向残渣中加入 2ml 蒸馏水,悬浮后再离心 l0min ,合并上清液,定容至刻度.
最新评论