摘要: 乳糖酸红霉素是红霉素的乳糖醛酸盐,主要抗生素为乳糖酸红霉素A和含有一定活性的乳糖酸红霉素B、C .《中国药典2000年版采用微生物检定法进行含量测定 ,英国药典和欧洲药典均采用HPLC .鉴于微生物检定法影响因素较多,故采用高效液相色谱测定乳糖酸红霉素含量的方法.红霉素A(96....
乳糖酸红霉素是红霉素的乳糖醛酸盐,主要抗菌活性为乳糖酸红霉素A和含有一定活性的乳糖酸红霉素B、C .《中国药典2000年版采用微生物检定法进行含量测定 ,英国药典和欧洲药典均采用HPLC .鉴于微生物检定法影响因素较多,故采用高效液相色谱测定乳糖酸红霉素含量的方法.
精密称取红霉素A对照品51.0 mg、红霉素B、C对照品2.5 mg和N一去甲基红霉素A 2.5 mg置25 ml量瓶中,加稀释液溶解并稀释至刻度,滤过,取续滤液作为对照品溶液.进样20μL进行测定.
精密称取红霉素A对照品适量(相当霉素25 mg),置10 ml量瓶中,加稀释液至刻度,摇匀,滤过.精密量取上述溶液l、2、5、10、20、40、80、100μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积对浓度(mg/ml )绘制标准曲线.其回归方程为：A ：98.98c一13.26(r=0.9999),表明红霉素在0.125～l2.5 ?g/ml 的浓度范围内与峰面积呈良好的线 溶液稳定性试验
取“1.2.7”项下的溶液.在0、2、5 h测定主峰面积,结果在5 h内峰面积无变化,溶液较稳定.
考虑到样品中可能存在游离的乳糖酸,为了考察其对含量测定的影响,按“1.2.7”项下浓度的80%、100%、120%精密称取乳糖酸红霉素各两份,按工艺配比加入适量乳糖酸钠辅料,分别置25 ml量瓶中,加入稀释液溶解,至刻度,摇匀,滤过,照“1.2.7”项下方法测定含量,计算回收率.结果辅料对测定无干扰.
1.2.6 方法精密度按“1.2.7”项下方法,对同一批号样品,分别取样平行测定5次,求得含量的RSD=1.6l%,表明分析方法精密度较好.
取样品适量,精密称定,加稀释液制成含红霉素2.0 mg/ml 的溶液.作为供试品溶液;精密量取供试品溶液20μL,注入液相色谱仪.另取红霉素A、B、C对照品适量,同法测定.按外标法以峰面积计算,3批样品的含量测定按干燥品以乳糖酸红霉素计,其结果分别为93.8% 、94.1%和93.7%.
文中试验主要以乳糖酸红霉素A计算,含量测定结果为乳糖酸红霉素A、B、c的总含量 英国药典(2000版)所用色谱柱为PLPP 100A,成本较高,国内较少使用.试用ODS柱,因叔丁醇黏度大,柱效下降很快,所以,采用Hypersil BDS 4.6 mm×200mm色谱柱,各峰间分离度等系统适用性均达到了英国药典的要求.在试验中也发现,由于流动相系统pH为9.2,缓冲液仅为0.01 mol/L 磷酸氢二钾,因此,流动相的缓冲容量很低,对色谱柱填料的溶解度较高,使得该方法的耐用性较差.
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