SDS-PAGE:SDS-PAGE的影响因素

  指单位长度(cm)支持物体上的电位降,它对泳动度起着十分重要的作用.一般电场强度越高,带电颗粒移动速度越快.根据电场强度可将电泳分为低压(常压)电泳100—500V,电场强度为2—10V/cm,分离时间需要数小时、数天或更长.高压电泳500—1000V,电场强度20—200V /cm,电泳时间短.有时仅需几分钟,主要用于氨基酸、肽、核苷酸.由于电压增高电流增大需要冷却装置.

  溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度.也决定物质所带净电荷的多少.对氨基酸、蛋白质等两性电解质而言,溶液PH值离等电点越远,颗粒所带净电荷越多,电泳速度越快.反之越慢.血清中:白蛋白pI 4.0;α2球蛋白 pI 5.06;β球蛋白 pI 5.1;γ球蛋白 pI 7.1.在pH 8.6的缓冲液中电泳时,都带负电荷,其泳动速度为:白蛋白>α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白.为了利于分离蛋白质混合液,应选择一种使各种蛋白质所带电荷差异明显的pH值.

  在有支持物的电泳时影响电泳的另一个重要因素是电渗作用.电渗作用:在电场中,溶液对固体支持物的相对移动.电渗作用根据支持介质的不同而产生不同程度和不同方向的电渗流动.因此电渗作用与电泳速度关系密切.

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