3) 静置约1~2 min,颜色开始加深,然后加入30 μL 终止液. 反应时间的长短,要以样本中的酶活性大小来做调整.因为我们只测定色析法各分划的相对酶活性,因此并不加终止液.
a. 以上步骤,只可测定GUS 活性的相对大小,对色析法所得到的各个分划进行侦测,相当方便,但并非酶绝对活性单位的测定方法.
b. 若要测定酶的绝对活性单位,要使用最适当的酶用量,使酶在反应一段固定的时间后,其生成物的呈色吸光度,落在光度计的可测范围的内;然后计算此段时间内,每分钟所产生的吸光度增加量,转换成生成物的莫耳数,即可求得其真正的活性单位.
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