SDS-PAGE:等电聚焦载体两性电解质的选择

  1.可溶性要好,为了等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移, 载体两性电解质必须具有很好的溶解性能.

  2.紫外吸收低,不发荧光.由于制备分离时,检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度,因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低.

  3.在等电点处必需有足够的缓冲能力,以便能控制pH梯度,而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程.

  4.在等电点必需的足够高电导,以便使一定的电流通过,而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数,使整个体系中的电导均匀,如果有局部电导过小,就会产生极大的电位降,从而其他部分电压就会太小,以致不能保持梯度,也不能使应聚焦的成分进行电迁移,达到聚焦.

  7.无毒、无生物学效应.载体两性电解质对哺乳动物的组织培养, 酶活性测定,免疫检测或注射到小白鼠或大鼠中都没有影响.

  8.应不与分离物质反应或使之变性.总起来说,当一个两性电解质的等电点介于两个很近的pk值之间时,它在等电点的解离度大,缓冲能力强,而且电导系数高,这 就是好的载体两性电解质.

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