非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性SDS-page电泳在操作上基本上是相同的,只变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS 等.一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白.分离碱性蛋白时候,要利用低pH凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高pH凝胶系统.酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳.
电泳条件 :100V恒压约20min,剂进入浓缩胶;改换160V恒压,当剂移动到胶板底部时,停止电泳,整个过程约80min.
染色和脱色:取出胶板于0.25%考马斯亮蓝染色液中染色约30min,倾出染色液,加入考马斯亮蓝脱色液,缓慢摇动,注意更换脱色液,直至胶板干净清晰背景.也可以用银染或者活性染色.
电泳结束以后,切取部分染色,然后根据染色结果切取含有蛋白质的胶带装入处理过的透析袋中,加入适量的缓冲液,最后把透析袋放入普通的核酸电泳槽中,并在电泳槽中加入适量的缓冲液(和透析袋中的缓冲液相同),低温电泳2-3小时即可.回收蛋白所用的缓冲液一般和电泳所用的缓冲液相同.
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