1．原理蛋白质中的肽键有双缩脲反应,在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物,在一定的范围内,颜色的深浅与蛋白质的含量成正比.此法性强,游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应,但此法不够,仅能测出毫克水平.
⑴ 准确称取牛血清白蛋白1.0g（必要时须首先采用凯氏定氮法测定牛血清白蛋白制品中实际纯蛋白含量,然后换算）,以生理盐水配成1%的浓度.
⑶ 混匀后于室温放置0.5h～1h,光电比色（540nm）,顺序由低浓度至高浓度,每管测3次,求其平均值.
注意：各种双缩脲试剂的配法、加量及室温静置时间均有差异,一旦标准曲线制定后,样品的测定则必须与标准曲线制定的条件一致,否则结果有差异.
1．原理 本法根据蛋白之中的芳香族氨基酸－色氨酸、酪氨酸在紫外光区的吸收特点而建立的.蛋白质在280nm波长附近有一吸收峰,其吸收程度与这些氨基酸的含量成正比.此法灵敏度高,可测到微克水平,操作简单,不需要加各种试剂,测完后,样品可回收.
将待测样品以盐水适当稀释,在0.10mg/ml~1.00mg/ml之间,以生理盐水为对照,测OD280 值,从标准曲线上查出蛋白含量.
1．原理 蛋白质中的酪氨酸与色氨酸和Folin酚试剂中的磷钨酸、磷钼酸作用后,在碱性条件下不稳定,被还原成蓝色的化合物（钼蓝）.因此通过比色即可测知标本中的蛋白含量.该法的优点是操作简单、灵敏度高,且不受溶液中脂多糖的干扰.
开口继续沸腾15min,驱除过量的溴,冷却后溶液呈微带绿色（如仍呈绿色,须重复滴加液体溴步骤）.稀释至1L,过滤,滤液置于棕色瓶保存.使用时用标准NaOH液滴定,以酚酞为剂,然后适当稀释（加水约1倍）使最终浓度为1mol/L.
蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280 －0.74OD260 （此为经验公式,即以不同浓度的蛋白质和核酸混合测定的数值所建立的）.
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