传统的复性方法稀释法和透析法.稀释复性法对样品几十倍,甚至上百倍的稀释会使样品的体积急剧增大,给后续的分离纯化带来很大的困难,而且复性过程中需要较大的复性容器.透析法耗时较长,而且要多次更换透析溶液.这两种方法的共同缺点是蛋白质在复性过程中会发生聚集而产生大量沉淀,复性效率低,通常蛋白质的活性回收率只有5~20%,而且复性后的蛋白质溶液中含有大量的杂蛋白,需要进行进一步的分离纯化.
在传统的重组蛋白质分离纯化工艺中,大多采用经典的软凝胶分离介质,由于这种介质的颗粒较大,分离效率较差,因此常常需要采用多种不同模式的色谱操作联用对目标蛋白质进行纯化,才能得到纯度符合一定标准的目标蛋白质.另外,这种色谱介质的耐压性很差,只能在流速较低的情况下进行操作,分离纯化时间较长.分离纯化步骤多和分离时间长使得蛋白质的质量回收率和活性回收率很低.而且在传统的重组蛋白质生产工艺中,蛋白质的复性和纯化是生产过程中两个的单元操作,也在很大程度上制约着生产效率.
由于复性和分离纯化分别单独进行,而且分离纯化步骤多,每一步都需要有与之配套的设备,致使设备投资大,生产成本高.随着生产规模的增加,这种弊端会愈来愈严重.
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