应用双抗体夹心法测定标本中人血清淀粉样蛋白A(SAA)水平。用纯化的人血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清淀粉样蛋白A(SAA)，再与HRP 标记的血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下成蓝色，并在酸的作用下成最终的。颜色的深浅和样品中的血清淀粉样蛋白A(SAA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中人血清淀粉样蛋白A(SAA)浓度。
1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融;
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
1. 试剂盒从冷藏中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
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