摘要:目的 探讨Survivin蛋白表达与喉癌临床病理因素的相关性. 方法 采用免疫组织化学技术(SP法)对45例喉癌组织和7例正常喉黏膜组织标本进行Survivin蛋白表达情况检测. 结果 喉癌组织中Survivin蛋白阳性表达率为62.2%(28/45),7例正常喉黏膜组织无Survivin蛋白表达.临床分期Ⅲ～Ⅳ期喉癌组织的Survivin蛋白阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ期喉癌组织(P<0.01);中、低分化喉癌组织的Survivin蛋白阳性表达率高于高分化喉癌组织(P<0.01);发生颈淋巴结转移的喉癌组织的Survivin蛋白阳性表达率高于无颈淋巴结转移的喉癌组织(P<0.01). 结论 Survivin蛋白的表达与喉癌临床分期、病理学分级和颈淋巴结转移有密切关系,它的高表达可能在喉癌的发生、发展和转移中起重要作用.
Survivin是近年来发现的一种新的凋亡蛋白,在肺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤组织中选择性表达,而在正常成熟组织中为阴性 [1] .喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)是头颈部常见的恶性肿瘤,为了解喉鳞癌组织中Survivin的表达,本文采用免疫组织化学SP法对喉鳞癌组织中Survivin蛋白的表达进行了研究,报告如下.
1.1 一般资料 喉癌组收集东莞市人民医院和上海复旦大学眼耳鼻喉科医院1994年3月～2004年4月收治的45例喉鳞癌患者手术切除并经病理标本.病理分级:高分化癌17例,中度分化癌12例,低分化癌16例.临床TNM分期根据UICC1997年标准:Ⅰ期6例,Ⅱ期10例,Ⅲ期17例,Ⅳ期12例.伴颈淋巴结转移24例,未发现颈淋巴结转移21例.全部病例术前均未进行放射治疗和化学治疗.另选7例正 常喉黏膜组织为对照组.
1.3 方法 所有标本经10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋切片,病理HE染色,光镜下观察,确定病质及病理学分级.免疫组化SP法步骤:石蜡切片脱腊和水化,3%过氧化氢室温孵育5～10min,以清除内源性过氧化物酶的活性,PBS浸泡5min;微波抗原修复,5%～10%山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10min,倾出血清,滴加1:100兔抗人Survivin一抗,37℃孵育1～2h,PBS冲洗5min×3;滴加适当比例稀释的通用型单抗IgG(1%BAS-PAS稀释),37℃孵育20min,PBS冲洗5min×3;滴加适当比例稀释的辣根酶标记链酶卵白素(PBS稀释),37℃孵育20min,PBS冲洗5min×3;滴加DAB显色;自来水冲洗,复染,透明封片.用PBS代替一抗作阴性对照.
1.4 结果判定 在显微镜下,Survivin蛋白以在肿瘤细胞胞浆中出现淡黄至棕颗粒者为阳性细胞.每例标本计数400倍光镜下随意5个视野,每个视野中阳性表达细胞数所占的比例,取其平均数,求得阳性细胞百分率.阳性细胞数≤5%为阴性,阳性细胞数>5%为阳性 [2] .
Survivin蛋白在喉鳞癌中阳性染色主要出现在肿瘤细胞胞浆中,为棕颗粒,少部分伴有细胞核阳性染色.喉癌组Survivin蛋白阳性表达率为62.2%(28/45),7例正常喉黏膜组织则为阴性.45例喉鳞癌中Survivin蛋白的表达情况见表1.表1 45例喉鳞癌中Survivin蛋白的表达情况[略]
剂或凋亡剂的细胞凋亡过程 [3] .另外,Sur- vivin以周期调节的方式表达于细胞周期的G 2 /M期,通过对纺缍体微管的作用调节细胞有丝过程,进而发挥其抗凋亡活性 [4] .
目前的研究资料表明,Survivin除在胎盘和胸腺组织中有微量表达外,在常见的恶性肿瘤如肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌等均呈高表达 [5～7] .在头颈部恶性肿瘤中有关Survivin的报道较少.本文采用免疫组化方法检测喉鳞癌组织中Survivin蛋白阳性表达率为62.2%,其主要表达于喉鳞癌组织的癌细胞胞浆中,少部分见细胞核内表达,与文献报道一致 [2] .本研究显示Survivin蛋白的表达与喉鳞癌临床TNM分期有关,随着临床分期从Ⅰ～Ⅳ期而逐渐增高.在有颈淋巴结转移的喉鳞癌组织中Survivin蛋白阳性表达率极高(达95.8%),高于无颈淋巴结转移的喉鳞癌组织.在病理学分级方面,随着病理分级由高分化至低分化,Survivin蛋白阳性表达率明显增高.这些说明,Survivin蛋白不仅在喉鳞癌组织中有较高的阳性表达,而且其表达的强弱与喉鳞癌的临床分期、病理特征有关,其的高表达提示肿瘤有较高的性.这样,检测Survivin蛋白表达对喉癌恶性度,病情轻重的评估可能具有重要的指导意义.由于喉癌的发生可以视为肿瘤细胞增殖活跃以及凋亡打破了细胞增殖与死亡之间的动态平衡,而导致肿瘤细胞无限增殖.Survivin蛋白的过度表达则进一步扩大肿瘤细胞增殖与凋亡之间的差距,结果是肿瘤细胞获得生长优势,促进了肿瘤的发生、发展和转移.
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