蛋白质在细菌中表现后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物.
仪器用具:恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意: 离心机及离心陀的温度要预冷完全,相对的两只离心管要平衡好,离心陀转速绝对不能超过最高速限;液态氮及冰筒;37℃温水浴
6) 将菌液放在液态氮中冷冻1 min,然后在37℃水浴中摇荡溶解的.如此反复三次,尽量不要产生大量气泡.将离心管的内容物倒入50 mL 高速离心机的离心管内.
8) 此上清加入5 mL buffer A-0 混匀后倒入烧杯,置碎冰上放冷,不时搅拌并缓缓加入固体硫酸铵 _____ gm,使成为70%饱和度,加完后再搅拌10 min.
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