丽春红(Ponceau S)也称猩红,可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测.丽春红带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带.丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色.
丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去.因此,蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜,用丽春红染色后将目的条带切下用于测序.
将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中,摇动5-10分钟或更长时间;取出印迹膜,用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗 2-3次,可出现清晰条带,记录结果;用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,每次3-5分钟,去除丽春红,进行后续的WB检测.
补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶,不过,在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下聚丙烯酰胺胶,起到固定蛋白的作用.
常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制,另外一种用三氯乙酸(TVA)和5-磺基水杨酸(5-Sulfosalicylic acid)配制.配制方法如下：
二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% (w/v)丽春红,30%的三氯乙酸,30%的5-磺基水杨酸.
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