等电点聚焦电泳(IEF)就是在电泳胶中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质在此体系中泳动时，不同的蛋白质即聚焦于与其等电点相当的pH上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开，由于IEF可使用超薄胶，并且其工作原理是建立在蛋白质等电点的差异上，因此分辨率极高，其与SDS-PAGE进行双向电泳的结果最多可以给出105以上的信息，是目前蛋白质组学研究的主要手段;一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄;由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离;可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH单位。电聚焦技术的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀，二 是样品中的成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。本部分实验即要求掌握最基本的IEF原理及具体操作，以适应后基因组时代的研究要求。
1) 预电泳胶凝固后，拆卸制胶装置，将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上(要求，电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润，在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡)。
2) 将分别被极缓冲液浸润的电极条置于胶面上将与电极接触的部位，盖上电泳槽罩子，连通电源，200V预电泳10min。
3) 电泳，将薄棉纸剪成小块，轻轻置于预备点样的胶面上，取10-15ul样品液，点于薄棉纸上，盖上罩子，连通电源进行电泳
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