蛋白提取:苦瓜籽蛋白的提取和分离

  近年来国内外许多学者已经从苦瓜籽中提纯多种蛋白质,并对其生理活性进行研究,研究发现,主要有真核细胞核糖体的蛋白质合成、抗艾滋病等活性,进一步研究表明,将苦瓜籽的核糖体失活蛋白与单克隆抗体偶联构成免疫毒素能特意性的杀伤靶细胞,因此,苦瓜籽核糖体失活蛋白在肿瘤、自身免疫性疾病及艾滋病的治疗中有着潜在的广阔应用前景.

  1.3仪器:TU-1810型紫外可见分光光度计(普析通用仪器有限责任公司) ,透析袋,层析柱,离心机(8000r/min),烘箱

  将苦瓜籽粗蛋白粗提液上CM23柱层析完全后,用50mmol/L NaCl洗脱控制流速为1.5mL/min,洗脱至基线nm波长处的吸光度(见表1):

  编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度

  收集吸光度从0.71开始的液体,并再次用250mmol/L的NaCl的5mmol/L PBS液洗脱,并收集吸光度高的液体,合并两次收集的液体放入预先处理好的透析袋内透析24小时.

  将透析后的液体上QAE-sephadex-25柱,每流出10mL测定一次275nm波长处的吸光度,见表3(从10号管开始用PBS液洗脱)

  编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度 编号 吸光度

  本方法采用时间较短,季氨乙基葡聚糖凝胶A—25的季氨乙基(—CH2CH2N+—(C2H5)CH2CHOHCH3,QAE型)使凝胶具有离子交换剂性质,有利于蛋白质、多肽等的分离.提取出的蛋白含量较高.

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