蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质之间聚集而沉淀.
1.取正混合血清加等量生理盐水,于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50%饱和(NH4)2SO4] (蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质之间聚集而沉淀.加入(NH4)2SO4时要先将其磨成粉末,再缓慢地边搅拌边加入).
4.重复上述第二步过程数次.将末次离心后所得沉淀物以0.02M PH7.4 PBS溶解至Xml装入透析袋.
1. 蛋白质的浓度：盐析时,溶液中蛋白质的浓度对沉淀有双重影响,既可影响蛋白质沉淀极限,又可影响蛋白质的共沉作用.蛋白质浓度愈高,所需盐的饱和度极限愈低,但杂蛋白的共沉作用也随之增加,从而影响蛋白质的纯化.故常将血清以生理盐水作对倍稀释后再盐析.
2. 离子强度：各种蛋白质的沉淀要求不同的离子强度.例如当硫酸铵饱和度不同,析出的成分就不同,饱和度为50%时,少量白蛋白及大多数拟球蛋白析出;饱和度为33%时γ球蛋白析出.
4. PH值：一般说来,蛋白质所带净电荷越多,它的溶解度越大.改变PH改变蛋白质的带电性质,也就改变了蛋白质的溶解度.
5. 温度：盐析时温度要求并不严格,一般可在室温下操作.血清蛋白于25℃时较0℃更易析出.但对温度的蛋白质,则应于低温下盐析.
最新评论