对蛋白质结构预测的同源模型化方法、线索化方法和从头预测方法实验测试和评价,结果表明：(1)在同源模型化方法中,得到一个好的序列比对是该方法的关键.当目标蛋白质与模板等同部分超过60%时,完全可以找到正确的比对.然而如果序列相似程度只有20-25%,则很难找到正确的比对.如果相似程度低于20%,则同源模型化方法几乎为力,因为在这种情况下,很难或无法找到合适的模板.(2)对于线索化方法,如果能够找到同一家族远程同源蛋白质,则可以获得比较好的预测结果.如果找到的模板属于不同的家族,则预测准确性难以.(3)对...

　　取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10～15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，-80oC保存。...

　　人类对蛋白质需要量的研究,虽已有100多年的历史,但理论上的发展缓慢.50年代前后,Rose等人对人体各种必需氨基酸需要量进行了一系列的测定,以后国联和联合国曾多次召集专家讨论和修订蛋白质和氨基酸的需要量,有关的研究工作至今仍在进行中....

⑴ 准确称取牛血清白蛋白1.0g（必要时须首先采用凯氏定氮法测定牛血清白蛋白制品中实际纯蛋白含量,然后换算）,以生理盐水配成1%的浓度....

　　5.沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品.在槽两端各1cm左右不要加样,中间的样品液一定要连贯.注意：不要产生气泡.否则影响到胶条中蛋白质的分布....

AACompIdent：与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同,AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白.该程序分析时需提交的相关信息包括：蛋白质的氨基酸组成、等电点pI和量(如果知道)、正确的分类及特别的关键词.此外,用户还需在六种氨基酸“组合”中作出选择,这影响到分析如何进行.例如,某种“组合”会把残基Asp/Asn(D/N)和Gln/Glu(Q/E)组合成 Asx(B)和Glx(Z);或者某种残基会在分析中被完全除去....

　　紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用.低浓度的盐,例如生化制备中常用的(NH4)2SO4等和大多数缓冲液不干扰测定.特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值....

　　紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量.测定范围为1-10mg蛋白质.干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等....

中性/中性双向凝胶电泳：非线状的DNA 在琼脂糖凝胶中的泳动行为和线状DNA 相比是不规则的.并且这种行为随着琼脂糖浓度或电压增加而加剧.而这正是中性/中性双向凝胶电泳的工作原理：在第一向中,样品在琼脂糖凝胶中以低琼脂 糖浓度、低电压的条件进行电泳,则DNA 主要根据其量大小被分离.在第二向中,则采用高浓度琼脂糖凝胶和较高电压条件,DNA 的分离则主要根据其形状....

用十二烷基硫酸钠(SDS)和还原剂(琉基乙醇或二硫苏糖醇)热处理蛋白质样品,蛋白质中的二硫键被还原,解离的亚基与SDS 发生1 : 1.4 的定量结合.SDS 使蛋白质亚基带上大量负电荷,了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异.亚基的构象均呈长椭圆棒状,各种蛋白质亚基-SDS 复合物表现出相等的电荷密度.在电场中其迁移速率仅与亚基质量有关,因此,SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳可以进行蛋白质亚基分离,并用来测量蛋白质亚基的质量....

　　(2)电泳后的凝胶用5～10倍体积固定液在室温下固定,酸性固定液扩散后可使凝胶中的溴酚蓝变黄.蓝色全部消失后,继续固定5min.为防止凝胶破裂,在进行步骤(2)之前可将凝胶浸泡于含20%甲醇、30%甘油的溶液中过夜....

同源模型化方法是蛋白质三维结构预测的主要方法.对蛋白质数据库PDB分析可以得到这样的结论：任何一对蛋白质,如果两者的序列等同部分超过30% (序列比对长度大于80),则它们具有相似的三维结构,即两个蛋白质的基本折叠相同,只是在非螺旋和非折叠区域的一些细节部分有所不同.蛋白质的结构比蛋白质的序列更保守,如果两个蛋白质的氨基酸残基序列有50%相同,那么约有90%的α碳原子的偏差不超过3%.这是同源模型化方法在结构预测方面成功的....

电泳条件 :100V恒压约20min,剂进入浓缩胶;改换160V恒压,当剂移动到胶板底部时,停止电泳,整个过程约80min....

　　本法操作简便迅速,且不消耗样品(可以回收),多用于纯化之蛋白质的微量测定.主要缺点：当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时,则产生—定误差,混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值,再按公式推算蛋白质含量....

　　2.紫外吸收低,不发荧光.由于制备分离时,检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度,因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低....