蛋白质修饰:蛋白质二级结构预测的发展及局限性

  二级结构预测的第三代方法运用蛋白质序列的长程信息和蛋白质序列的进化信息,使二级结构预测的准确程度有了比较大的提高,特别是对β折叠的预测准确率有较大的提高,预测结果与实验观察趋于一致。一般75%的氨基酸残基可以被置换而不改变蛋白质的结构,然而有时改变几个关键的残基则可能导致蛋白质的结构。这好像是两个矛盾的结论,但解释又非常简单。一个蛋白质在其进化过程中探查了每个上氨基酸可能的与不可能的变化,不可能变化的部分是进化保守区域。可变部分的变化不改变结构,而不可变部分的变化则改变蛋白质的结构,由此失去...

指南单克隆抗体生产的细胞工程学

  哺乳动物细胞是用于生产单抗在内的商业化治疗性蛋白产品的主要宿主细胞。而中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)是目前大规模生产单抗最常用的宿主细胞。CHO细胞在抗体的实验室制备以及工业级的生产中起着越来越重要的作用。CHO细胞产品具有以下特点:人体应用安全、糖结构与天然的人单克隆抗体相似、易于转染、基因扩增系统强大、易于适应悬浮培养和无血清培养基、高密度生长的能力,因此非常合适用于大量单克隆抗体稳定生产。...

Native-PAGE:非变性胶蛋白电泳

  为了在测量数据处理、测量结果的表达,根据“测量不确定度评定和表示”JJF1059-1999的要求,我们对奶粉中蛋白含量测定结果的不确定度进行评定.应用测量不确定度评论,分析奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定....

蛋白质含量测定:奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定

  为了在测量数据处理、测量结果的表达,根据“测量不确定度评定和表示”JJF1059-1999的要求,我们对奶粉中蛋白含量测定结果的不确定度进行评定.应用测量不确定度评论,分析奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定....

蛋白质含量测定:6种方法测定蛋白质含量

  为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点.收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸.实验和计算方法这里从略....

SDS-PAGE:低背景的蛋白质银染方法

  *说明,此步中洗涤过程要控制好,时间太长,可能显色时间太长甚至染不出色;反之,时间太短,银没有洗干净,背景变深.但做几次以后就很快掌握了....

2D电泳技术:凝胶电泳操作注意事项

  2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用....

蛋白质修饰:蛋白质机构预测-线索化法

  对于一个未知结构的蛋白质(U),如果找到一个已知结构的远程同源蛋白质(T),那么可以根据T的结构模板通过远程同源模型化方法建立U的三维结构模型.一个成功的远程同源模型化方法要解决三个问题:(1)检测远程同源蛋白质(T);(2)U和T的序列必须被正确地比对或对比排列;(3)修改一般的同源模型化过程,以应用于相似度非常低的情况,即处理更多的环区,建立合理的三维结构模型....

蛋白质含量测定:蛋白测定方法之Folin—酚试剂法(Lowry法)

  folin―酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤.以后在生物化学领域得到广泛的应用.这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰lowry反应.而且对后者的影响还要大得多.酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用.浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),(5%),丙...

SDS-PAGE:固相pH梯度等电聚焦简介

地址:陕西省西安市灞桥区新寺569号唐都医院临床教学楼312室 邮箱:联系电话 传线号 技术支持:陕西奈特星网络发展有限公司...

蛋白质修饰:蛋白质二级结构预测-最邻近方法(NearestNeighboring

基于上述的策略,最邻近方法在预测二级结构方面包括两个过程,一是学习过程,二是预测过程.在学习阶段,用一个滑动窗口(例如长度为15)扫描已知结构的训练序列,序列个数为几百个,并且这些序列彼此之间的相似性很小.通过窗口扫描形成大量的短片段(称为训练片段),记录这些片段中心 氨基酸残基的二级结构.在预测阶段,利用同样大小的窗口扫描给定的序列U,将在每一个窗口下的序列片段U’与上述训练片段相比较,找出50个最相似的训练片段.假设这些相似片段中心残基各种二级结构的出现频率分别为fα、f&be...

眼泪可以预测糖尿病并发症

  来自新南威尔士大学的研究人员测量了糖尿病患者眼泪样本中的P物质水平,通过这种非侵入性测试可以评估糖尿病神经病变的风险,研究人员指出,糖尿病患者的眼泪样本中P物质水平与早期角膜神经损害有着直接的关系,P物质水平异常可能导致角膜溃疡的发展,以及糖尿病患者伤口愈合困难。...

蛋白质含量测定:血清总蛋白质的测定方法

  3、基于蛋白中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法由于各种蛋白质中上述两种氨基酸的组成比例不同,特别是白蛋白含色氨酸为0.2%,而γ-球蛋白中含量达2%-3%,导致较大的差异.Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2++,集中原法和双缩脲反应两者的作用,使呈色灵敏度提高.其中75%的呈色依赖于Cu2++.反应产物最佳吸收峰在650-750nm,方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右.有利于检测较微量的蛋白质.但试剂反应仍易受多种化合物的干扰....

2D电泳技术:双向电泳操作步骤及相关溶液配置

取0.001g BSA(牛血清白蛋白)用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线ul 的BSA溶解液,另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液,再在每管中加入相应体积的双蒸水(总体积为80ul),然后,各管中分别加入4ml的Bradford液(原来配好的 Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用),摇匀,2min在595nm下,按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值,再测样品 OD值.(测量过程要在一个小时内完成)....

SDS-PAGE:SDS-PAGE 蛋白质电泳常见问题

1. 剂前沿呈现两边向上或向下的现象.向上的"微笑"现象说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,所以导致凝胶中有不同的迁移率所致.这种情况在用 较厚的凝胶以及垂直电泳中时常发生.向下的"皱眉"现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的"三明治"底部有气泡 或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象....