蛋白分离纯化：吸附层析法（AdsorptionChromatography）
层析用硅胶为一多孔性物质,中具有硅氧烷的交链结构,同时在颗粒表面又有很多硅醇基.硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关.硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分,因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低.若吸水量超过17%,吸附力极弱不能用作为吸附剂,但可作为分配层析中的支持剂.对硅胶的活化,当硅胶加热至100～110℃时,硅胶表面因氢键所吸附的水分即能被除去.当温度升高至500℃时,硅胶表面的硅醇基也能脱水缩台转变为硅氧烷键,从而了因氢键吸附水分的活往,就不再有吸附剂的性质,虽用水处理亦不能恢复其吸附活性...
基础知识：蛋白质空间结构
蛋白质的生物学功能在很大程度上取决于其空间结构,蛋白质结构构象多样性导致了不同的生物学功能.蛋白质结构与功能关系研究是进行蛋白质功能预测及蛋白质设计的基础.蛋白质只有处于它自己特定的三维空间结构情况下,才能获得它特定的生物活性;三维空间结构稍有,就很可能会导致蛋白质生物活性的降低甚至.因为它们的特定的结构允许它们结合特定的配体,例如,血红蛋白和肌红蛋白与氧的结合、酶和它的底物、激素与受体、以及抗体与抗原等.知道了基因密码,科学家们可以推演出组成某种蛋白质的氨基酸序列,却无法绘制蛋白质空间结构.因而,人...
蛋白表达：新颖的融合蛋白表达系统
通常,两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题.在这种方式中,目的基因被引入某个高表达蛋白序列(fusion tag)的3’末端,比如大肠杆菌的一段序列,或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因,它提供良好表达所必需的信号,而表达出的融合蛋白的N末端含有由 fusion tag编码的片段.fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分.比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等...
蛋白质含量测定：蛋白质浓度测定
蛋白质溶液浓度测定方法有多种,下述几种方法可供选用.蛋白质浓度的测定,往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法....
蛋白提取：蛋白质裂解液的选择
所以,蛋白质裂解液的选择除了要根据其“产量”,还要看所选择的一抗的是否能识别经变性的蛋白质样品.一般对于不能识别变性的蛋白质样品的一抗,其蛋白质裂解液都会是不含去污剂或含有较温和的非离子去污剂(如：NP-40,Triton X-100)....
基础知识：染色方法（蛋白质染色、脂蛋白、核酸）
染色液种类繁多,各种染色液染色原理不同,灵敏度各异.使用时可根据需要加以选择.常用的染色液有：...
蛋白提取：苦瓜籽蛋白的提取和分离
1.3仪器：TU-1810型紫外可见分光光度计（普析通用仪器有限责任公司） ,透析袋,层析柱,离心机（8000r/min）,烘箱...
蛋白分离纯化：超滤原理和优缺点
1、滤过程是在常温下进行,条件温和无成分,因而特别适宜对热的物质,如药物、酶、果汁等的分离、分级、浓缩与富集....
蛋白提取：植物蛋白质提取方法总汇
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清....
蛋白分离纯化：高效反相液相色谱
由于在反相色谱中，使用了乙腈、甲醇等价格高且有一定毒性的试剂，在一定程度上使该方法的使用受到。例如可使部分蛋白失活。因此，该方法用在分析鉴定方面更多一些，特别是对有机溶剂具有耐受性的样品。例如多肽样品，可用HPRPC对合成的肽huBPP进行分析。...
基础知识：蛋白质药品冷冻干燥技术研究进展
冷冻干燥技术最早于1813年由英国人Wollaston发明.1909年Shsckell试验用该方法对抗毒素、菌种、狂犬病毒及其它生物制品进行冻干保存,取得了较好效果.在第二次世界大战中,对血液制品的大量需求大大刺激了冷冻干燥技术的发展,从此该技术进入了工业应用阶段.此后,制冷和真空设备的飞速发展为快速发展冷冻干燥技术提供了强有力的物质条件.进入上个世纪的***十年代,科学技术的迅猛发展和人民群众对健康保障的需求为药品冷冻干燥技术的飞速发展提供了强大的动力,在药品冻干损伤和机理、药品冻干工艺、药品冷冻干...
Western-blot：western显影常见现象、原因及解决方案
其中两张片子的压法如下描述: 先剪一张比膜长2"3厘米的片子(以供贴胶带),然后剪2片细小透明胶带贴到片子的左右两边(贴时胶带留一半用于粘到封口膜上),然后将片子压到膜上,并使透明胶带留出的一半粘到封口膜上.这样就固定了第一张,就不会因为放、取第二张而使第一张移动了.然后放第二张,与第一张片子贴在一起就行,注意片子要干燥,压片前用纸擦干封口膜,以避免被底物液体污染导致与下面一张粘在一起.取时用手轻轻拂过就可以把片子与下面一张错开了,不要用手抠,否则下面一张也移动了. 在洗下面一张片子时一定要取掉...
基础知识：常用染色液和试剂的配制
将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油,在研钵内研磨30min以上,至看不见颗粒为止,再将全部(66mL)剩余甘油倒入,于56℃温箱内保温2h.然后再加入甲醇(66mL),搅匀后保存于棕色瓶中.母液配制后放入冰箱可长期保存,一般刚配制的母液染色效果欠佳,保存时间越长越好....
蛋白表达：登革病毒E蛋白区段基因克隆及高效表达
由登革病毒(DV)引起的急性传染病登革热,通过蚊虫流行,人普遍易感.部分患者可出现严重的登革出血热或登革休克综合症(DHF/DSS),死亡率较高.此病世界范围流行,主要在东南亚地区.我国海南、广西等地曾流行过多次.对DHF/DSS的发病机理进行研究证明：中和剂量的抗体(Ab)可起免疫作用,而异型Ab或亚中和剂量的Ab却起增强感染作用〔1,2〕.利用单克隆抗体和生物学技术研究证明,性Ab和增强性Ab是由不同的抗原决定簇产生的〔3-5〕,但这些决定簇至今尚不清楚,给疫苗的研制带来了困难.通过对DV抗原表位的分...
蛋白分离纯化：DNA沉淀法提取C1q
6. 上清液过Sephadex G200柱(柱长100cm)，用pH值5.3、0.3mol/L PB洗脱，以除去DNase和DNA消化产物，将C1q峰收集后，加2.8%硫酸铵使之沉淀(4℃)，5h后离心沉淀，沉淀物溶于pH值7.0、0.1mol/L PB中，并用此缓冲液透析过夜，再离心除去不溶物，上清液即为纯化90%以上的C1q，可用于双扩散试验，用于放射免疫试验则需进一步纯化;...