用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织,或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞,然后加入抽提试剂去除非蛋白成分,离心分离即可得到总蛋白;简便高效,30-60分钟内完成提取.试剂盒可进行100次提取,可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备.每次可提取1～100 mg实体组织或1´107 细胞.一次从10-100mg实体组织提取的总蛋白的量通常足以进行数十次Western Blot或免疫沉淀.适用：...

内参是最容易被忽略的一项.我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础.特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析.所以你需要内参....

这种称为“micro-western arrays”(微印迹分析)的方法能将蛋白检测常用实验：Western blot的识别能力,和DNA芯片检测的高通量能力结合起来,帮助科学家们一次实验就可以观测到细胞中各种蛋白之间的网络系统,节省了每次反复实验的人力和物力....

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出.又称为色层法、层析法....

脑啡肽(Enk)N端5肽线形结构是与δ型受体结合的基本功能区域,干扰素(IFN)是一种广谱抗病毒抗肿瘤的细胞因子.黎孟枫等人化学合成了 EnkN端5肽编码区,通过一连接3肽编码区与人α1型IFN基因连接,在大肠杆菌中表达了这一融合蛋白.以体外人结肠腺癌细胞和多形胶质瘤细胞为模型,采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法证明该融合蛋白肿瘤细胞生长的活性显著高于单纯的IFN,通过Naloxone竞争阻断实验证明,活性的增高确由 Enk导向区介导....

　　Survivin是近年来发现的一种细胞凋亡蛋白家族,除具有较强的细胞凋亡作用外,还有调节细胞周期和肿瘤血管等多种生物学特性.它选择性表达于多种常见的恶性肿瘤,而在癌旁正常组织和分化组织中不表达.PTEN是人类发现的第1个具有酪氨酸磷酸酶作用的抑癌基因,在调控细胞生长以及凋亡过程中也发挥着重要的作用.本文利用免疫组化技术检测Survivin、PTEN和cyclinD1蛋白在骨肉瘤中的表达,初步探讨Survivin在骨肉瘤发病机理中的作用以及其与PTEN、cyclinD1相互间的关系....

　　(2)将糊状物移入3号砂芯漏斗中,用蒸馏水淋洗.如此重复,每加一次去离子水,浸泡一段时间,再进行抽滤,至洗涤液pH等于4即可(pH试纸试)....

(5) 取出含菌块的离心管置碎冰上,待菌块溶解后,以液体均匀悬浊的.再加入10 mL lysis buffer 轻轻悬浮的....

遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...

　　易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择.但是,在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象....

　　(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对于易分解的生物大应选用新鲜材料制备.细胞的破碎...

　　固相pH梯度分辨率高,故使用预窄pH范围的分离,对未知样品,应先用宽pH范围的载体两性电解质聚焦大致确定其等电点,再用固相pH梯度凝胶精确分离,对复杂成分样品和双向电泳的第一相,应采用宽范围的固相pH梯度凝胶....

　　NC膜与蛋白质的结合无任何性，因此作为性检测靶蛋白的探针-一抗蛋白也能与NC膜结合，而一旦这种结合情况发生，当加入二抗后，背景上将出现许多非性条带，而则势必造成目标蛋白的不可检测性。因此Western印迹技术的性、可行性将取决于能否对NC膜上一些蛋白质潜在结合位点进行有效封闭。在实际操作中这些结合位点一般用脱脂奶粉封闭，也可用血清白蛋白封闭。如果操作中加蛋白封闭后，非性背景仍很大的话，则可在封闭液中加入Tween20，Tween20的存在，能降低背景噪声，且不影响抗体与靶抗原的结合。...

　　蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质.蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品....

1) 预电泳胶凝固后，拆卸制胶装置，将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上(要求，电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润，在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡)。...