蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来.每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白.蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段.粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本体积大、成分杂,要求所用的树脂高容量、高流速,颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开,防止目...

实验动物(Laboratory Animal,LA)指由人工培育,来源清楚,遗传背景明确,对其携带的微生物和寄生虫实行,用于生命科学研究、药品与生物制品生产和检定,以及其他科学研究的动物.实验动物追溯其祖先,可来源于野生动物、经济动物(家畜、家禽)、警卫动物和观赏动物等,但却有别于这类动物.实验动物一般具有以下三大特点：...

　　亲和层析以蛋白质或生物大和结合在介质上的配基间的亲和力为基础.本实验采用磁座和结合有Ni2+的磁珠在变性或非变性条件下对融合蛋白进行分离纯化,只需通过“结合-清洗-洗脱”三个简单的操作步骤就可完成.该系统可根据样本量灵活调整磁珠用量,从而进行小量和大量蛋白纯化,并且磁珠可以再生使用....

　　Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白.pET系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体系统进行表达的载体,其表达原理见下图....

　　一般的细菌用抗菌素就能将其杀灭,但也有些细菌却无论什么抗菌素都不怕.更让医生们束手无策的是,这种所谓的“耐性细菌”的种类还在不断增加....

透析袋是最常用的方法，透析袋有各種大小不同的網目，可以分開量不同的大小。常見的透明年糕紙，也有近似透析袋的作用；而香腸的腸衣也正是一種透析膜，可以透出水分及小。透析除盐原理：利用半透膜原理，透析袋为半透膜，水和盐离子等小可以通过，而大的蛋白质不能通过.器材：１．pH7.4，0.01M PB缓冲液，30%PEG２．纳氏试剂操作：１．透析大量除盐：将装有粗提物的透析袋悬于烧杯内，用透析1~2小时，再用PB置4℃透析换液多次，用纳氏试剂检查至透析液内无氨离子２．透析后，袋内水增多，用30%PEG浓缩,...

　　目前,蛋白质工程尚未有统一的定义.一般认为蛋白质工程就是通过基因重组技术改变或设计合成具有特定生物功能的蛋白质.实际上蛋白质工程包括蛋白质的分离纯化,蛋白质结构和功能的分析、设计和预测,通过基因重组或其它手段或创造蛋白质.从广义上来说,蛋白质工程是通过物理、化学、生物和基因重组等技术蛋白质或设计合成具有特定功能的新蛋白质....

　　5.取上述1%溶化的琼脂糖10ml放入60℃水浴中,加入预热的适当浓度的血清抗体迅速混匀,铺入切去的琼脂部分.冷却后,用不含抗体琼脂密封切口....

　　真空冷冻技术简称为冻干技术.国家质检总局锅炉压力容器检测研究中心主要从事真空冷冻干燥过程优化研究的专家介绍,冻干原理是在真空状态下,利用原理,使预先冻结的物料中的水分不经过冰的融化直接以冰态为水蒸气而除去,从而获得干燥制品的技术.实践表明,真空冷冻干燥脱水技术是一项适用于果蔬、肉类、水产、药品的护色、保鲜、保质及保持营养成分的高新加工技术....

　　蛋白质纯化实验过程中经常会出现各种各样的问题,这里汇集了实验中经常出现的问题,做了一个总结.蛋白质纯化推荐参考书籍：蛋白质纯化与实验鉴定指南、生物工程下游技术、...

与Southern或Northern blot杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水...

　　TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质表面的水数目，即蛋白质表面亲水基团与水形成水化膜的程度和带电荷的情况，当中性盐如硫酸铵等加入蛋白质溶液时，由于中性盐对水的亲和力大于蛋白质，使蛋白质周围的水化膜减弱或消失，蛋白质溶解度降低，同时由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生了改变，蛋白质表面电荷被大量中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋...

　　丽春红对蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸馏水,PBS或其它适当溶液洗去.因此,蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜,用丽春红染色后将目的条带切下用于测序....

　　以pET-32a(+)为例,介绍将目的基因克隆进载体并进行表达获得重组蛋白的过程,从而熟悉根据自己的要求采用不同的载体进行原核表达的全过程....

Novagen最新推出的Strep•Tag II 8氨基酸小标签,就是一个新选择.我们早已熟知biotin和streptavidin之间能够高度的结合,这种性结合早已广泛用于免疫或者非放标记反应中.Novagen模拟Biotin设计了一个8个氨基酸的小标签Strep•Tag II,正好能的结合到streptavidin上,又再优化streptavidin与小标签的结合位点,使之与Strep•Tag II融合标签的结合力超出普通streptavidin约100倍,称为Strep...