蛋白分离纯化：螯合沉淀法提取C1q
2. 收集沉淀，用以上缓冲液洗一次，然后将沉淀物溶于32ml pH值5.0、0.02mol/L醋酸盐缓冲液中;...
蛋白分离纯化：蛋白质分离纯化的新技术及技术要点
生物技术的发展非常迅速,基因工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术,已经能设计、制造、生产人们急需的多种蛋白质.和其它生物产品的生产过程一样蛋白质的生产过程一般也分为上、中、下游过程.上、中游过程是运用生物技术生产目标产物,下游过程是指对含有目标产物的物料进行处理、分离、纯化、加工目标产物.本文主要综和近年来国内外的研究结果,介绍了蛋白质的最新分离纯化技术....
基础知识：核酸、蛋白技术常用贮存液的配制
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性.称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具.可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料....
基础知识：蛋白质分析的相关技术介绍
生物体组织细胞→破碎→离心→盐析、等电点沉淀→凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析和高效液相层析....
蛋白提取：蛋白质提取与纯化技术
以蛋白质和结构与功能为基础,从水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质.蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识,但基本原理不外乎两方面.一是得用混合物中几个组分分配率的差别,把它们分配到可用机械方法分离的两个或几个物相中,如盐析,有机溶剂提取,层析和结晶等;二是将混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于来同区域而达到分离目的,如电泳,超速离心,超滤等.在所有这些方法的应用中必须注意保存生物大的完整性,防止酸、硷...
基础知识：蛋白质一级结构（primary structure)
每一种蛋白质都有自己特有的氨基酸的组成和排列顺序即一级结构,由这种氨基酸排列顺序决定它的特定的空间结构,也就是蛋白质的一级结构决定了蛋白质的二级等高级结构,这就是荣获诺贝尔的著名的Anfinsen原理....
蛋白分离纯化：酵母蛋白质的抽提
1.从OD600=2的细胞培养物中抽提酵母蛋白质.培养物的一种简单制备方法是将细胞接种到5mlYPD中,过夜培养后获得指数培养物(OD600=0.5～2.0)....
蛋白表达：原核表达--宿主菌株选择指南
作为原核表达的宿主,对外源基因的表达会产生一定的影响,是勿庸置疑的.每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂,按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”――因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的,当出现问题时,我们需要经验判断问题所在.宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？...
蛋白表达：结核分支杆菌katG蛋白的高表达与纯化
异烟肼(INH)是一种最经济有效的抗痨药,几乎所有的抗痨方案中均包括IN H.结核分支杆菌编码的katG基因的突变可致结核分支杆菌对INH 产生耐药性[1].自1992年以来,对于katG基因变异或缺失造成分支杆菌对异烟肼 耐药的基因水平研究已较为深入[1,2],有必要在蛋白水平对耐药机制进行进一步 研究.本研究将含有katG基因的pET24b-katG表达载体埃希大肠杆菌BL21(DE3)菌株 ,获得稳定的高表达菌株后进一步对表达产物进行了纯化,并对纯化产物进行了酶活性的初 步检测....
基础知识：有关气质联用基础知识
GC/MS被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定,其具有GC的高分辨率和质谱的高灵敏度,是生物样品中药物与代谢物定性定量的有效工具. 质谱仪的基本部件有：离子源、滤质器、检测器三部分组成,它们被安放在真空总管道内. 接口：由GC出来的样品通过接口进入到质谱仪,接口是色质联用系统的关键....
Western-blot：Western Blot 实验试剂选购指南
采用独特的发光底物系统,是世界上最灵敏的ECL Western Blot化学发光试剂.用于Western Blotting条带的荧光发光,检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原.由两种溶液组成,使用前混合.SuperECL Plus超敏发光液,价格低廉,灵敏度大大高出Amersham和Santa Cruz公司同类ECL产品100倍以上,也明显高出Pierce的SuperSignal West Pico化学发光系统数倍,但背景更干净,发光时间持久,可以长达10小时以上....
Western-blot：蛋白质的检测与分析――Western blot 操作步骤
几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集.最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上.变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关.在达到饱和的状态下,每克多肽约可结合 1.4克去污剂,借助已知量的标准参照物,则可测算出多肽链的量....
蛋白分离纯化：蛋白质的沉淀反应和等电点测定
本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点.用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制各种不同pH值的缓冲液.向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点....
蛋白提取：蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异,主要取决于蛋白中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例,其次取决于这些基团的排列和偶极矩.故结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因.温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的条件.提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用.将细胞内蛋白质提取出来.并与其它不需要的物质分开.但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液(如血浆、消化硫等)中,可以不必经过提取直接进行分离.蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物,如脂类、糖类以及其他可溶性...
Western-blot：Western blot 实验操作及其注意事项
2)在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸(预先用转移缓冲液浸湿),将凝胶夹在中间,保持湿润和没有气泡....