微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定.对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况：(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,...

从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题,首先是细胞中含有许多种酶,每种酶的浓度又很低,只占细胞总蛋白质中的极小部分(叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外),而许多植物组织中蛋白质的含量又很低.此外,各种酶的存在状态不同,有在细胞外的外酶,在细胞内的内酶,内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶,也有的存在于细胞质中,提取时都应区别对待,作不同处理.如果酶仅存在于细胞质中,只要将细胞破碎,酶就会转移到提取液中;但如果是与细胞器(如细胞壁、细胞核、线粒体、原生质膜、微粒体等)紧密结合的酶,这时如仅仅破碎细胞还不够,还需...

与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达....

(3)Sephacryl 系列胶体有相当大的吸附力,因此要在缓冲液加入0.15 M 以上的NaCl 以除去非性吸附....

1叶蛋白饲料研究概况,叶白饲料又称绿色蛋白浓缩物(Leaf Protein Concentrates简称LPC),是将新鲜牧草或其它青绿植物经压榨后,从其汁液中提取的粗蛋白产品.其中苜蓿是最重要的提取叶蛋白的原料植物.绿色植物中蕴藏着世界上最大的蛋白质资源....

　　确定无误后进行下一步....

　　临床病理学是一门介于临床与基础之间的重要学科,不仅能为临床各科尤其是外科提供准确的病理诊断,而且能够判断出疾病的进程及预后,对于病人的治疗具有重要的指导作用[1].作为一名病理医生,要拥有这种权威性且不临床医生的信任却并非易事.从一名病理实习生成长为具有丰富经验的临床病理医生,不仅需要经过长期的专业训练,而且需要自身的艰苦努力及上级医生的正确指导....

　　这个絮状的东西有颜色吗,会不会是染菌了,或者是脏的东西没有处理干净,你可以用0.5MNaoH泡半小时,沉淀后倾去上清,做三次这样的处理,如果还有不干净的东西,你可以用6M盐酸胍泡半个小时,然后处理和NaoH一样,再换水,这样你看能不能洗回来,如果不能很好沉淀下来,那就不能用了.凝胶类的填料很容易长菌,用完得洗干净,保存在20%的乙醇中....

　　离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术.离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质,即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成,根据引入解离基团的不同,可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂.各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同,亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加,而随离子水化膜半径的增加而降低.对具体离子交换纯化,需要主要离子交换剂的选择和处理.洗脱不同蛋白的最恰当的离子强度液不一定一样,通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱,纯化...

　　这是我的电泳图谱,第8条泳带的最下边就是我的目的蛋白带,我需要复性,这是一段杀菌蛋白,我要复性之后做抑菌圈.我用的pET-3C的载体,BL21表达...

　　用基因工程的手段表达蛋白质,必需经过纯化才能实现最终目的.不同性质的蛋白质纯化条件各不相同太难摸索,这一点和核酸相差甚远,所以将目的蛋白和一个亲和纯化标签融合表达,通过亲和纯化Tag蛋白来纯化目的蛋白,就成为常用的迂回手段.大的Tag最后要经过切割得到目的蛋白,而His-Tag,这个只有6个组氨酸大小的标签在pH8.0时不带电,很小,几乎没有什么免疫原性,经多种融合蛋白验证对蛋白的分泌、折叠和结构,甚至功能几乎没影响,可以放在C端或者N端,更重要的是能够高度亲和Ni离子――而固化金属离子亲和层析已经相...

①目前基因注释的方法还有较高的出错率，尤其对那些存在不连续基因(即在基因内插有非编码的核苷酸序列)的复杂基因组。②假基因 (pseudogene)的存在，这些假基因有和真基因相同的ORF，但却从不表达(已发现表达的假基因)③RNA水平上遗传信息加工(RNA editing)④蛋白质水平上遗传信息的加工(蛋白质剪接...

BIO-RAD 的圆盘电泳槽,国产的不推荐,因为 上槽 Biorad 的铂金丝凹进去了一点,不是很进去,而国产的凹得太进去了以至于电聚焦时产生的气泡绕在铂金丝一圈,影响电聚焦....

　　首先谢谢你的答复.第一步柱子是去掉大部分与conA结合的蛋白,然后在上的交换柱,文献上基本上都这样,而且电泳显示确实去掉了很多的蛋白.不过我将试试直接上离子柱的效果....

　　仪器：高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床....