3.待胶体沉降完全后,高度应在15 cm 左右.胶柱以buffer A-0 一直流洗,流速快慢可以不考虑;连接好收集器,每试管收2.5 mL.离子交换法的胶体平衡极为重要,可测流出液的pH 或离子浓度,看是否与buffer A-0 相同,若不一样则需要再流洗的....

　　3)在做WB,因为是血清标本,含有较多的白蛋白,可能影响我的实验结果.我请问过ptglab楼主,他推荐我来这儿问一问.请问高手有什么方法吗?哪一种比较简单经济?蓝色琼脂糖凝胶可以分离吗?...

醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophoresis)以醋酸纤维薄膜为支持物.它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成.它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15mm为宜.太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎....

　　2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清....

　　空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化.空气中微生物的污染可使样品变质,样品吸湿后会引起潮解变性,同时也为微生物污染提供了有利的条件.某些样品与空气中的氧接触会自发引起游离基链式反应,还原性强的样品易氧化变质和失活,如维生素C、巯基酶等....

3) 超声粉碎，采用300w，10s超声/10s间隔，超声20min，反复冻融超声3次至菌液变清或者变色。...

　　从头预测方法一般由下列3个部分组成：(1)一种蛋白质几何的表示方法：由于表示和处理所有原子和溶剂的计算开销非常大,因此需要对蛋白质和溶剂的表示形式作近似处理,例如,使用一个或少数几个原子代表一个氨基酸残基;(2)一种能量函数及其参数,或者一个合理的构象得分函数,以便计算各种构象的能量.通过对已知结构的蛋白质进行统计分析,可以确定蛋白质构象能量函数中的各个参数或者得分函数;(3)一种构象空间搜索技术：必须选择一个优化方法,以便对构象空间进行快速搜索,迅速找到与某一全局最小能量相对应的构象.其中,构象空间...

仪器用具：恒温震荡培养箱37℃;高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全,相对的两只离心管要平衡好,离心陀转速绝对不能超过最高速限;液态氮及冰筒;37℃温水浴...

3.酵母培养、、高密度发酵等操作接近原核生物,远较真核系统简单,非常适合大规模工业化生产. +++ =...

　　要从全血,培养上清液,血清,腹水中分离蛋白质,用于制备、分析,运用磁珠作为固相载体进行免疫测定的优点在于快速的结合动力学和简单的分离,洗涤过程.在蛋白质纯化中,为了得到高结合容量需使用大孔如粒径为3.5μm,并用链霉亲和素修饰的磁珠,生物素修饰的免疫球蛋白(IgM)可顺利结合到磁珠上.键合配基的活性不会因孔结构而改变....

原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成,对mRNA的合成极为重要.在起始点上游5～10 bp处,有一段由6～8个碱基组成,富含A和T的区域,称为Pribnow 盒,又名TATA 盒或-10区.来源不同的启动子,Pribnow 盒的碱基顺序稍有变化.在距起始位点上游35 bp处,有一段由10 bp组成的区域,称为-35区.时大肠杆菌RNA聚合酶识别并结合启动子.-35区与RNA聚合酶 s 亚基结合,-10区与RNA聚合酶的核心酶结合,在起始位点附近DNA被解旋形成单链,RNA聚合酶使第一和第...

构建表达质粒需要多种元件，需要仔细考虑它们的组合，以最高水平的蛋白质合成。E.coli 表达载体的基本结构[8]。...

　　微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定.对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况：(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,...

　　实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)....

　　提高外源基因表达水平的基本手段之一，就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段，以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度和药物。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔(IPTG)外源基因表达。...