蛋白表达：Survivin蛋白在喉癌中的表达及临床意义
Survivin是近年来发现的一种新的凋亡蛋白,在肺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤组织中选择性表达,而在正常成熟组织中为阴性 [1] .喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)是头颈部常见的恶性肿瘤,为了解喉鳞癌组织中Survivin的表达,本文采用免疫组织化学SP法对喉鳞癌组织中Survivin蛋白的表达进行了研究,报告如下....
蛋白质含量测定：人血清、血浆及相关液体样本中血清淀粉样蛋白A(SAA)含量的测定
1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融;...
蛋白分离纯化：重组蛋白纯化的基本策略
分辨率：由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现.总的来说,当杂质和目标蛋白性质相似时,在纯化的最后阶段分辨率是重要因素. 1、通过组和各种方法使纯化步骤之间...
蛋白表达：Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一
腺病毒介导的基因转移可以在人细胞中最高水平地表达目的蛋白质 (1).因为含目的基因的重组腺病毒DNA是游离于细胞基因组外的 (不整合入宿主基因组),所以目的蛋白质得到瞬时的高水平表达.更重要的是利用腺病毒表达系统可以将外源基因转到及不的细胞中表达....
蛋白表达：原核表达条件优化
本实验中重组表达质粒PrP-pET-32a(+)不稳定的原因可能是PrP对E.coli BL21(DE3)具有细胞毒性.pET-32a(+)来源于pBR-322,pBR-322源于ColE1.ColE1、pBR-322 、pET- 32a(+)都失去了分配功能区par.而天然质粒具有功能区par,可以质粒在每次细胞周期中准确的进行分离,并均等的分配到子代细胞中去.功能区 par对质粒PrP-pET-32a(+)的稳定性是不可缺少的[4].缺少功能区par的pET-32a(+)质粒在每次细胞周期中随机分配到...
蛋白表达：优化基因表达的关键因素之：基因的重新设计和合成
遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...
蛋白分离纯化：重组蛋白生产的问题
在传统的重组蛋白质分离纯化工艺中,大多采用经典的软凝胶分离介质,由于这种介质的颗粒较大,分离效率较差,因此常常需要采用多种不同模式的色谱操作联用对目标蛋白质进行纯化,才能得到纯度符合一定标准的目标蛋白质.另外,这种色谱介质的耐压性很差,只能在流速较低的情况下进行操作,分离纯化时间较长.分离纯化步骤多和分离时间长使得蛋白质的质量回收率和活性回收率很低.而且在传统的重组蛋白质生产工艺中,蛋白质的复性和纯化是生产过程中两个的单元操作,也在很大程度上制约着生产效率....
蛋白质含量测定：考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法(bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法....
Native-PAGE：Native-PAGE注意事项
2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度;...
蛋白质修饰：基于蛋白质物质的蛋白质预测软件
用户可以把序列整理为FASTA格式,或提供SWISS-PROT标识,或者是可唯一确定的添加号.若用户提供了序列,该工具会自动计算全序列的 pI和量;若用户提供的是SWISS-PROT标识,程序会显示该条目的描述和记录;如果用户给出了一段序列片段范围则计算将在该片段上进行,而不是针对整个序列....
2D电泳技术：琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定
由于同工酶在不同组织、器官中的分布不同,即具有组织器官性.因此已利用同工酶的酶谱作临床诊断的依据,也被利用于生物分类及遗传育种等工作中....
蛋白质修饰：“点击化学”的应用：多肽和蛋白质修饰
“点击化学”(Click Chemistry)的核心是开辟一整套以含杂原子链接单元C-X-C为基础的组合化学新方法，用少量简单可靠和高选择性的化学转变来获得更广泛的多样性，其模块化、高效和多样性以及高选择性等特点，使之特别适合偶联生物与人工配体，因为这类偶联反应一般需要在非常温和的条件(如生理学条件)下进行，如此一来便可保留多肽、蛋白质以及碳水化合物等生物的结构完整性以及基于这些结构的功能。而且点击反应后生成的氮杂唑基团具有芳香环的稳定性，不易分解，可耐受强酸、强碱，并能在多种氧化还原条件下保持稳定。因此...
Native-PAGE：Native-PAGE常见问题解析
预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂,提高分辨率,不加任何物质,一般30-60分钟后加样电泳....
蛋白质含量测定：影响紫外吸收法测定蛋白质DNA浓度的因素
由于蛋白质是生物大,而紫外吸收往往是其内的小基团所引起的,例如酪氨酸、苯丙氨酸,色氨酸和肽键等等.因此当蛋白质不同,其包含的上述小基团含量发生变化时,就会影响蛋白质含量的测定.然而蛋白质种类繁多,结构复杂,很难对其进行有效的归类.例如人体内含蛋白质的种类约有10万种,整个生物界的蛋白质种类估计有100亿种....
SDS-PAGE：种子蛋白质系统分析：种子蛋白质亚基分析
用十二烷基硫酸钠(SDS)和还原剂(琉基乙醇或二硫苏糖醇)热处理蛋白质样品,蛋白质中的二硫键被还原,解离的亚基与SDS 发生1 : 1.4 的定量结合.SDS 使蛋白质亚基带上大量负电荷,了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异.亚基的构象均呈长椭圆棒状,各种蛋白质亚基-SDS 复合物表现出相等的电荷密度.在电场中其迁移速率仅与亚基质量有关,因此,SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳可以进行蛋白质亚基分离,并用来测量蛋白质亚基的质量....