ELISA:ELISA标准操作及技术服务的常见问题分析

大部分ELISA 检测均以血清为标本.血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非性显色.血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应.一般说来,在5 天内测定的血清标本可放置于4℃,标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG 聚合,使间接法的试剂本底加深.超过一周测定的需-20℃保存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀并避免产生气泡.混浊或有沉淀的血清标本...

饲养:几种饲料去霉去毒法

  利用机械或人工的方法先对饲料进行筛选,剔除霉变饲料;然后将未霉变的饲料进一步干燥,以达到去霉防霉变的目的....

实验动物模型:大鼠印防已碱点燃癫痫模型

SD大鼠,6~8周龄,体重200~250g , 雄性.将印防已碱(PTX)在给动物注射前24h新鲜配制成溶液.本法参考并改良了国外Shandram的制作方法,模型组大鼠每日上午8:00~10:00腹腔注射印防已碱1.5mg/kg ,1日1次,连续20d .每次注射后参照Racine分组标准(见大鼠青霉素癫痫模型)观察大鼠的行为,判定是否癫痫性发作.凡是获得连续5次2级或以上惊厥记录的大鼠,被认为为已完全点燃.完成20次注射后,仍未达到完全点燃状态的大鼠继续腹腔给药数日(<10d),直至达到完全点燃状...

Western-blot:(图文)western显影常见现象、原因及解决方案

上样蛋白量30 60 100 ug,4度封闭过夜(包括室温下2h+过夜),一抗室温1h,二抗室温1h, ECL显色结果背景都很深,整个膜都很亮.而目的条带都相对很浅,时间从几s到1min,目的条带都很细.开始考虑是封闭不好的原因,过夜封闭+室温2h还不行....

蛋白分离纯化:盐析法纯化免疫球蛋白

1.取正混合血清加等量生理盐水,于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50%饱和(NH4)2SO4] (蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度,以及蛋白质带有电荷的情况决定的.当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水的亲和力大于蛋白质,于是蛋白质周围的水化膜层减弱乃至消失.同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降低,使蛋白质之间聚集而沉淀.加入(NH4)2SO4时要先将其磨成粉末,再缓慢地边搅拌边加入)....

上海师大与康奈尔大学两校教授联合发布菠菜栽培种基因组草图

  菠菜是重要的叶用蔬菜,含有丰富的类胡萝卜素、叶酸和维生素C等营养物质。菠菜原产于亚洲中部,现已在全球广泛种植,据报道,2014的年产量为2430万吨,我国菠菜产量占世界总产量的89%,是世界上最大的菠菜种植和消费国家。近年来,国内外菠菜的基因组学研究取得一定进展,但关于栽培菠菜的进化、驯化,以及菠菜基因组结构和进化等资料有限。...

质粒提取:质粒实验常见问题分析

  参考见解:这种情况出现的几率较小,常出现在较大质粒或比较特殊的序列中.解决办法:1、降低培养温度,在20~25℃下培养,或室温培养可明显减少发生概率.2、使用一些特殊菌株,如Sure菌株,它缺失了一些重组酶,如rec类等,使得质粒复制更加稳定.3、质粒抽提有一个酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的NaOH浓度过高造成的,请大家注意一下!【有两种方法可以在提质粒前判断菌生长是否正常:1、利用你的嗅觉.只要平时做实验仔细点就能闻出大肠杆菌的气味,新鲜的大肠杆菌是略带一点刺鼻的气味,但不至于反感.而在泥水状的菌液...

基础免疫实验:Masson染色

  结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色....

免疫荧光:间接免疫荧光法测抗体

  染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体.第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体.如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体....

饲养:怀孕母猪的饲养与管理

  为了缩短猪的繁殖周期,提高年产仔窝数,需要对配种后的母猪进行早期怀孕诊断.早期怀孕诊断的方法很多,现把便于养殖户应用的两种方法介绍如下:...

实验动物模型:动物模型复制方法和应用

  目前我国生物医学科学研究中,动物疾病模型主要用于三个方面:即实验生物学、实验病理学和实验治疗学(新药筛选亦属于实验治疗学范畴).由于研究目的不同,对于疾病模型的要求也有所区别.如实验病理学,它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病.整个疾病复制过程,就是它的研究内容,目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原.而实验治疗学则完全不同,疾病的复制仅是它研究的开始,因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中,某些治疗措施或药物的疗效如何....

Western-blot:胶体电泳法方法步骤

2) 三明治组合后直立站好,准备所要浓度的SDS 胶体溶液如表4.2. 两片0.75mm 厚的平板约需10 mL 分离胶体溶液,以及5 mL 焦集胶体溶液.APS液到最后才加入,未加APS 以前可在真空中抽去溶液中的气体....

蛋白分离纯化:蛋白质纯化之亲和层析法

2.除去胶面上方的缓冲液,并取出样本 (IEX) 使其回到室温,慢慢用滴管加到亲和胶体上,小心勿弄乱胶体表面;让样本没入胶体中,同时收集流出液每管2.5 mL....

Sci Rep:突破!利用CRISPR-Cas9技术开发出帕金森疾病新型筛选工具

  上的研究报告中,来自中佛罗里达大学(University of Central Florida)的研究人员通过研究利用突破性的基因编辑技术开发出了一种帕金森疾病的新型筛查工具,帕金森疾病是一种...

DNA提取与纯化:琼脂糖凝胶中的DNA的回收:DEAE-纤维素膜电泳

  EB-DNA复合物的激发会导致染料的光猝灭以及单链DNA的.用302nm擅长光源取代254nm光源将会降低这两种危害....