蛋白表达：优化基因表达的关键因素
遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...
质粒提取：SDS取碱裂解法制备质粒DNA：中量制备
细胞的制备1、挑后的单菌落,接种到 10ml 含有适当抗生素的丰富培养基中（ LB 、 YT 或 Terrific 培养液）,于 37 ℃剧烈振摇下培养过夜.为了确保培养物通气良好：试管的体积应该至少比细菌培养液的体积大 4 倍.试管不宜盖紧培养物应在剧烈振摇下培养.2、将培养物转移到一个 15ml 的试管中,与 4 ℃以 2000g （用 Sorvall SS-34 转头, 4000r/min ）离心 10min 后收集细菌.3、用轻缓抽吸的方法,尽可能吸干培养液.除去上清的简便方法是用一次性吸头或巴斯...
中国率先尝试这种临床基因治疗 美学者：可能导致突变
特别值得一提的是，来自四川大学华西医院肿瘤学家卢铀教授及其研究小组，率先在全球范围内开展首个CRISPR-Cas9基因编辑临床试验治疗肺癌，一时引起业界轰动，得到了国内外各大的广泛关注。去年11月15日，美国《Nature》还以“CRISPR gene-editing tested in a person for the first time”为题作了相关报道。...
免疫组化：免疫组化技术之金银法
免疫金银法(Immurogold-sliver method,IGSM)或称免疫金银染色(Immurogold-sliver staining,IGSS)是一种新的免疫组织化学技术,近年来又不断改进,已成为最为灵敏而又经济的方法之一.免疫金银法实际上是在免疫金法的基础之 上发展形成....
抗体抗原实验：微型双功能抗体抗CD3抗Pgp的构建和表达
【摘要】目的:构建和表达抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体,并测定该微型双功能抗体的生物学活性.方法:采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3/抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和排阻层析鉴定纯化产物;采用免疫荧光法、放射免疫分析法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性.结果:DNA序列测定结果表明:抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达2mg/l以上,纯化产物中二聚体的比例达90%,具...
实验动物基本操作：猴子的脑脊液采集
对于猴子的麻醉,由于形体小,通常是麻醉.最常用的是盐酸,大概8mg/Kg体重即可,麻醉速度很快,麻醉时间比较短,就是副反应大了点,容易产生过多的唾液堵塞气管.由于该管理比较严格,目前很难买到.也可用速眠新注射液,效果差一点,而且不同批号的有效浓度差距比较大....
实验动物模型：动物模型的设计原则和注意事项
在动物身上复制人类疾病模型.目的在于从中找出可以推广(外推)应用于病人的有关规律.外推法(Extrapolation)要冒风险,因为动物与人到底不是一种生物.例如在动物身上无效的药物不等于临床无效,反之也然.因此,设计动物疾病模型的一个重要原则是,所复制的模型应尽可能近似于人类疾病的情况....
蛋白表达：原核表达操作步骤及注意事项
易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择.但是,在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象....
蛋白提取：蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理
(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存,对于易分解的生物大应选用新鲜材料制备.细胞的破碎...
基因检测可知孩子“天赋”？专家：夸大成分过多
“天赋基因”究竟是什么？这种检测是否有科学依据？检测结果能说明什么？针对这些问题，中新网记者进行了调查采访。...
Nat Commun：突破！科学家首次鉴别出“肌肉力量”基因
上的研究报告中，来自剑桥大学的研究人员通过研究首次在人类机体中鉴别出了能够影响肌肉力量的常见遗传因子；文章中，研究人员利用来自英国生物样本库中超过14万参与者的双手...
免疫荧光：结缔组织的染色方法
一般所说的结缔组织是指纤维性结缔组织而言,其结构特点是细胞间质内基质外含有较多的纤维成分,主要是胶原纤维、弹性纤维和网状纤维,我们仅简述这三种纤维的常见染色方法....
免疫细胞检测技术：细胞增殖检测：H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法
5、培养结束后,将培养物移到离心管内,用3%冰醋酸6ml,分两次冲洗培养瓶,并将冲洗液也装入离心瓶中,2 000r/min离心10min,去上清.沉淀再用3%冰醋酸洗涤一次,同样离心去上清....
实验动物模型：疾病动物模型
目前我国生物医学科学研究中,动物疾病模型主要用于三个方面：即实验生物学、实验病理学和实验治疗学(新药筛选亦属于实验治疗学范畴).由于研究目的不同,对于疾病模型的要求也有所区别.如实验病理学,它着重于研究用某种特定方法复制出某些疾病.整个疾病复制过程,就是它的研究内容,目的是通过疾病的复制去探讨疾病的病因学和发病原.而实验治疗学则完全不同,疾病的复制仅是它研究的开始,因为它的主要目的是为了阐明在该病的发生发展过程中,某些治疗措施或药物的疗效如何....
实验动物基本操作：生理学实验动物的麻醉方法
通常在麻醉前20～30分钟,皮下注射盐酸吗啡或硫酸吗啡(每公斤体重5～10毫克)及阿托品(每公斤体重0.1mg)...