SDS-PAGE:固相pH梯度等电聚焦分析讨论

  固相pH梯度分辨率高,故使用预窄pH范围的分离,对未知样品,应先用宽pH范围的载体两性电解质聚焦大致确定其等电点,再用固相pH梯度凝胶精确分离,对复杂成分样品和双向电泳的第一相,应采用宽范围的固相pH梯度凝胶....

Western-blot:Western印迹法检测蛋白

  NC膜与蛋白质的结合无任何性,因此作为性检测靶蛋白的探针-一抗蛋白也能与NC膜结合,而一旦这种结合情况发生,当加入二抗后,背景上将出现许多非性条带,而则势必造成目标蛋白的不可检测性。因此Western印迹技术的性、可行性将取决于能否对NC膜上一些蛋白质潜在结合位点进行有效封闭。在实际操作中这些结合位点一般用脱脂奶粉封闭,也可用血清白蛋白封闭。如果操作中加蛋白封闭后,非性背景仍很大的话,则可在封闭液中加入Tween20,Tween20的存在,能降低背景噪声,且不影响抗体与靶抗原的结合。...

质粒提取:质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测

  细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后,菌体裂解,可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内出来,经琼脂糖凝胶电泳,因各种核酸的迁移率不同将上述核酸分成不同的带.用溴化乙锭(EB)染色后,在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光.根据荧光的,可区分不同的核酸带.【材料】...

Sci Adv:科学家鉴别出诱发心脏病发生的关键基因

  2017年6月12日 讯 /生物谷BIOON/ --心脏病在美国每年能诱发60万人死亡,而且每四个人中至少有一人死于心脏病,尽管生活方式会直接诱发该病,但遗传因素在疾病的发生过程中也...

ELISA:ELISPOT

7. PBS洗3~5次,用底物BCIP/NBT显色,显微镜下观察显色反应,显色后及时终止反应;...

免疫荧光:直接免疫荧光法测抗原

  将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应.其优点是方法简便、性高,非性荧光染色少.缺点是性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体.此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查....

实验动物模型:免疫缺陷动物疾病模型

  胸腺分泌淋巴细胞缺陷导致细胞免疫功能,临床表现为毛发缺乏和胸腺发育不全.1966年在苏格兰的一群小鼠中发现了一种突变种--自发小鼠,该鼠生长不良,繁殖力低下,易发生严重感染,到1968年对小鼠进行纵膈连续切片,显示出胸腺缺失,遗传检查为常染色体隐性遗传,这种动物能接受同种或异种组织移植.现在有多种遗传性无胸腺动物,如裸小鼠、裸大鼠、裸豚鼠和遗传性无脾症小鼠动物模型....

实验动物基本操作:实验动物编号标记方法

  这种标记方法在实验室最常使用,也很方便.使用的颜料一般有3-5%苦味酸溶(黄),2%硝酸银(咖啡色)溶液和0.5%中性品红(红色)等.标记时用毛笔或棉签蘸取上述溶液,在动物体的不同部位涂上斑点,以示不码.编号的原则是:先左后右,从上到下.一般把涂在左前腿上的计为1号,左侧腹部计为2号,左后腿为3号,头顶部计为4号,腰背部为5号,尾基部为6号,右前腿为7号,右侧腰部为8号,右后腿计为9号.若动物编号超过10或更大数字时,可使用上述两种不同颜色的溶液,即把一种颜色作为个倍数,另一种颜色作为十位数,这种交互...

蛋白分离纯化:蛋白质特性与分离纯化技术的选择

  蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质.蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品....

蛋白分离纯化:IEF分离蛋白质

1) 预电泳胶凝固后,拆卸制胶装置,将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上(要求,电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润,在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡)。...

探究某个基因的外显子覆盖度情况【直播】我的基因组87

  根据这个图,我们就可以很明显的看出,DMD基因NM_000109本的1,10-17号外显子缺失,用IGV一个个的看这些外显子区域,是同样的结果!可能是芯片捕获不到,也可能是样本本身变异,造成的段缺失。但是这个图的信息就非常有用!(当然,这个肯定不是我的啦,我很正常的哦)...

基础免疫实验:血清补体总活性测定

(1)绵羊红细胞(sheepredbloodcell,SRBC) 自绵羊颈静脉采血,注入装有等量或二倍量阿氏(Alsever)液的无菌三角烧瓶中,轻摇3-5min,分装,4℃保存,可用2-3周左右.试验时,取一定量的SRBC用生理盐水洗涤3次,最后1次洗涤离心的条件每次试验要保持一致.试验时一般配成1×109SRBC/ml.为使每次试验时SRBC的浓度标准化,可根据经细胞计数器校准的浓度为1×109SRBC/ml的细胞悬液,用分光光度计测定其OD541nm值,以后每次试验均参照此OD值校正 SRBC浓度;...

实验动物基础:动物剥制标本的制作方法

  1、砒霜防腐粉:主要用于爬行类、哺乳类.配制时砒霜、明矾、樟脑按2∶7∶1研成粉末,混匀即可....

实验动物基础:生物医学研究中各类实验动物的选择索引

  蛇与人类关系疏远.可作再生,神经生理和毒物(抗凝)的研究.蛇毒可用以制备抗血清.蛇毒的分离和提取物用于镇痛、抗癌、溶解血栓等....

蛋白分离纯化:蛋白质纯化的方法选择

  蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来.每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白.蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段.粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本体积大、成分杂,要求所用的树脂高容量、高流速,颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开,防止目...