Western-blot:蛋白质的检测与分析――Western blot 操作步骤

几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集.最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上.变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关.在达到饱和的状态下,每克多肽约可结合 1.4克去污剂,借助已知量的标准参照物,则可测算出多肽链的量....

蛋白分离纯化:蛋白质的沉淀反应和等电点测定

  本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点.用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制各种不同pH值的缓冲液.向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点....

科学家发现干细胞身份的新型调节子

  随着多细胞有机体的起源,多能干细胞就能够分化成为机体所有类型的细胞,这些细胞能在培养基中无限增殖,因此其被认为是不朽的,而多潜能性的黄金标准就是胚胎干细胞(ESC)。诸如皮肤细胞等体细胞能够被重编程产生iPSCs,而新产生的ipsCs和ESCs一样具有类似的特性;同样地,多能干细胞对于再生医学研究至关重要,因为其可以作为健康分化细胞的潜在来源,包括神经元细胞等;此外,这些细胞还能代表一类无价的资源,帮助研究人类的发育机制以及多种疾病的发病原因,比如阿尔兹海默病或帕金森疾病等。...

质粒提取:牙签法小量制备质粒DNA

以下介绍的简易操作方法是有 Barns 修订的方法,它对于大菌落(直径 2-3mm )很有效,而且所获 DNA 的量足够琼脂糖电泳时一个泳道的上样量....

免疫检测分析:放射免疫分析法的建立

  标记抗原应具备:①比放射性高,以方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护....

免疫检测分析:免疫胶体金标记抗体及检测抗原

3.确定蛋白质包被的最佳浓度:将蛋白质作连续10倍稀释各1ml,加入5ml胶体金溶液,1分钟后加入1ml 10%氯化钠溶液,静止5分钟;以胶体金溶液为空白对照测定光吸收度,选择最低吸收值的蛋白质浓度用于正式包被....

实验动物解剖:豚鼠生物学特性和解剖生理特点

  3、嗅觉、听觉较发达,对各种刺激均有极高的反应,如对音响、嗅味和气温突变等均极,故在空气混浊和寒冷中易发生肺炎,并引起流产,受惊时亦易流产....

实验技能SOP:小鼠明暗穿箱实验的标准操作规程(SOP)

仪器:分析天平,摄像仪,机,器,小鼠明暗箱(为一个敞开的箱子(45cm×27cm×27cm),内部分为明箱和暗箱,明箱占箱子的 3/5,暗箱占2/5,有一个高出箱壁20cm的隔板分开,隔板的底部开一个7.5cm×7.5cm的方口.明箱内涂成白色,由一个60W的白纸灯泡照明,灯泡高出箱子17cm.暗箱内涂成黑色,上方17cm置一个不通电的红色灯泡.箱子底部划上边长9cm的方格.)....

细胞培养:微载体培养技术的介绍

  其原理是将对细胞无害的微载体颗粒加入培养容器的培养液中,作为载体,使细胞在微载体表面附着生长,同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。...

帕金森、老年痴呆,干细胞怎么治最好?Nature出新招

  每当谈到与干细胞治疗相关的临床试验时,就会有人问干细胞什么时候能治疗帕金森、阿尔兹海默症等。7月10日,《Nature Communications》上的一项新研究带来了好消息,科学家们...

蛋白提取:蛋白质提取与制备的原理和方法

蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异,主要取决于蛋白中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例,其次取决于这些基团的排列和偶极矩.故结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因.温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的条件.提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用.将细胞内蛋白质提取出来.并与其它不需要的物质分开.但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液(如血浆、消化硫等)中,可以不必经过提取直接进行分离.蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物,如脂类、糖类以及其他可溶性...

Western-blot:Western blot 实验操作及其注意事项

  2)在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸(预先用转移缓冲液浸湿),将凝胶夹在中间,保持湿润和没有气泡....

不同患者的机体基因组或会影响基因编辑疗法的有效性和安全性

本文研究增加了一些新,即基因编辑或许需要适应每个病人的基因组,从而才能够确保被靶向作用的基因或附近DNA序列中不会出现突变。医学博士Stuart Orkin说道,人类的DNA序列并不相同,而且被认为是“正常”的DNA序列或许也并不能解释所有的差异;在设计治疗性编辑的靶向系统时我们推荐需要将常见的变异考虑在内,同时也为了能最大限度地发挥功效,减少患者潜在的安全隐患。...

免疫检测分析:电化学发光免疫测定原理

[/strong] 电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI).ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术.电化学发光法源于电化和化学发光法,而ECLI 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物,是一种在电极表面由电化学引发的性化学发光反应,包括了电化学和化学发光二个过程.ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测....

实验技能SOP:实验动物的取血标准操作规程(SOP)

  家兔固定箱内,用手揉擦耳部,使中央动脉扩张.左手固定兔耳,右手持注射器,中央动脉末端进针,与动脉平行,向心方向刺入动脉.一次取血量15ml.取血后棉球止血.注意兔耳中央动脉易发生痉挛性收缩.抽血前要充分使血管扩张,在痉挛前尽快抽血,抽血时间不宜过长.中央动脉末端抽血比较容易,耳根部组织较厚,抽血难以成功....