实验动物基本操作：动物股动脉和股静脉插管方法
3、用止血钳细心将股神经首先分出,然后分离股动、静脉间的结缔组织,清楚地股静脉,如作插管可分离出一段静脉(约2～2.5cm).穿两根细线备用.再仔细分离股动脉,将股动脉与其部的组织分离开,长约2～2.5cm.切勿伤及股动脉分支.动脉下方穿两根细线、在动物行肝素化后作股动、静脉插管.狗的血管粗大,插管较易.家兔血管细,插管较难;因此要细致耐心和掌握要领....
细胞培养：转染实验技巧介绍(中英文)
表皮细胞广泛遍布于身体,正常的表皮细胞较难转染,尤其是使用基于脂质体技术的转染试剂.我们使用电转(Amaxa)方法转染正的结肠表皮细胞并得到了65%的GFP标记细胞.非常感谢SignaGen,现在我们使用GenJet Ver II可以成功转染正的结肠表皮细胞并且转染效率显著提高至75%....
细胞培养：动物细胞培养——清洗与灭菌
70%或75%酒精，0.1%新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0.5%过氧乙酸，乳酸，37%甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。...
蛋白表达：星形细胞瘤中FHIT、PCNA蛋白表达及意义
1996年Ohta[1]等人利用外显子捕获法(exon trapping)确定并克隆出FHIT基因.该基因定位在3号染色体短臂3p14.2区域,跨越人类染色体脆性部位FRA3B,并含有编码组氨酸三联体的功能区,故命名为脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad, FHIT).FHIT基因存在于大多数正常组织中,许多恶性肿瘤存在该基因异常.研究FHIT 基因在各种肿瘤组织中的改变,确认其是否为抑癌基因是近年来肿瘤学研究的热点之一.Ji等[2]发现用FHIT的腺病毒转导的肺癌细胞系有...
蛋白分离纯化：蛋白质纯化经验指南（1）
请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列,没有问题.细胞破碎后,融合蛋白在沉淀里,我用助溶剂提取后,可以用GST做亲和层析,但效率只有50～60%左右.洗脱完融合蛋白不需要助溶剂,但这样的条件下切割完后目的蛋白会沉淀,我用0.5%CHAPS助溶可勉强溶解部分,目的蛋白疏水性比较强....
Immunity：我国学者在抗病毒免疫研究方面获得重要突破
RNAi是一种在真核生物中高度保守的后基因沉默机制，并已被在真菌、植物和无脊椎动物中起到关键的抗病毒免疫作用。在RNAi抗病毒过程中，病毒RNA复制所产生的双链RNA（dsRNA）被宿主Dicer蛋白识别并切割成小干扰RNA（siRNA）。这些病毒衍生的siRNAs（vsiRNAs）被转移到 RNA 沉默复合体 (RISC)，并介导同源病毒RNA的降解，从而达到抗病毒的目的。尽管RNAi在哺乳动物中也保守存在，并被广泛用于生命科学与技术研究，然而，在哺乳动物中，RNAi是否同样能起到抗病毒免疫作用仍不清楚...
DNA提取与纯化：人外周血白细胞DNA制备
，释出血红蛋白及细胞核，在反应体系中含一定浓度蔗糖，核膜内外的渗透压，以防止核膜破裂，通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。向核悬液中加入SDS核膜，并使DNA从核蛋白中解离...
免疫荧光：免疫胶体金检测技术实验步骤
免疫胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子.由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术....
免疫检测分析：免疫检测的基础知识
ELISA是一种免疫测定.免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法.在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质....
实验技能SOP：血清尿素的测定标准操作规程(SOP)
【方法】取家兔2只,1只注射氯化高汞5ml/kg(0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg),另1只注射等量的生理盐水.48小时后,从家兔耳静脉取血1ml,制取血清,按血清尿素测定方法测定血清尿素含量....
实验动物模型：铁离子致大鼠外伤后癫痫动物模型
模型制作方法 SD大鼠,体重220~250g ,雄性.大鼠以2%异戊巴比妥钠溶液(50mg/kg)腹腔注射麻醉,立体定位上固定.剪去头顶的毛,常规消毒头顶皮肤后沿头顶正中线cm.剥离头顶筋膜,颅骨.在左侧颅骨冠状缝后3mn ,矢状缝旁2mm处用高速牙钻钻—直径为2mm的孔.另外再钻5个直径2mm安放电极的孔,孔的按D Ambrosio所采用的方法,即以前囟点为原点,矢状缝为Y轴,过原点垂直于Y轴的直线为X轴,坐标轴(单位为mm)：孔的坐标分别为(4,0),(4,—6),(&mdas...
细胞培养：G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL
6.确定最佳筛选浓度：在筛选10～14天内能够所有细胞的最小G418浓度即为最佳筛选浓度。在第一轮就筛选出最佳G418浓度的可能性不大，最有可能的是出现这种情况：用某一浓度G418的量在筛选14天后还不能细胞，而用下一个梯度的 G418的量在10天前就看不到活细胞了。假如是400ug/ml不能细胞，而800ug/ml在第5天就把所有细胞都了，则可以再用500ug/ml、600ug/ml、700ug/ml进一步筛选，以确定最佳筛选浓度!：由于特性明确的细胞系G418的最佳用量还是比较稳定的，所以有时候不需要...
西雅图抗癌药Adcetris获批准用于霍奇金淋巴瘤患者干细胞移植后的巩固治疗
此次Adcetris被授予无条件批准，是基于关键性III期AETHERA研究的数据。该研究是探索ASCT之后立即进行巩固治疗作为一种新的治疗模式来延长移植效果以预防HL患者病情复发方面完成的首个随机试验。研究结果显示，ASCT之后立即进行Adcetris巩固治疗，将为患者提供一种有意义的新治疗选择。根据一个集中审查委员会评估的数据，与ASCT之后立即进行安慰剂+最佳支持护理(BSC)相比，HL患者在ASCT之后立即进行Adcetris+BSC巩固治疗时无进展期(PFS)实现统计学意义的显著延长(HR=...
蛋白表达：去Tag不留痕――NEB原核表达系列
融合表达在最初的鉴定和纯化时有标签会方便许多,但是融合表达的问题是最终如何去掉外源的融合标签,特别是有可能用于医疗用途的蛋白质,往往必需去掉所有外源的氨基酸.可是在最后要除掉它的时候就会带来许多麻烦――比如要在25度用蛋白酶切割10多个小时容易引起目的蛋白变性、切割后的蛋白酶污染问题,以及目标蛋白会有残留氨基酸.为了解决这个问题,通用医疗(原安玛西亚)有在5℃下进行切割的蛋白酶,Qiagen也有4℃下进行切割的蛋白酶,这样可以最大程度地防止蛋白降解.同时Qiagen还通过基因让蛋白酶也带上标签,这样一...
蛋白分离纯化：蛋白质纯化经验指南（7）
你有个贴子中说在纯化过程中上样的样品中pH和盐浓度,以及种类等组分一定要平衡缓冲液完全相同至少相当.我想试试你说的硫酸铵沉淀后直接过疏水柱,那我是不是要先确定复溶后样品的盐浓度再确定平衡缓冲液的盐浓度啊,如果是我怎么检测样品的盐浓度啊...