DNA提取与纯化：质粒DNA的大量制备
1)将 30ml 含有目的质粒的细菌培养物培养到对数晚期(DNA 600约0.6).培养基中应含有相应抗生素,用单菌落或从单菌落中生长起来的小量液体闭关物进行接种....
基因编辑工具CRISPR的十大神奇用途
就像许多疾病那样，癌症是人们基因突变的结果。研究人员认为，基于CRISPR的疗法将来有可能减缓肿瘤扩散的速度，甚至能够完全治愈癌症。在这个领域，中国已经取得了初步进展。2016年10月份，中国一位肺癌患者成为世界上首个接受细胞注射的人，这些细胞利用被利用CRISPR修改过。由成都四川大学肿瘤学家卢博士（Lu You）领导的研究人员，修改了从病人自身血液中提取的免疫细胞，并禁用了可产生某种特定蛋白质的基因，这种蛋白可帮助癌细胞劫持正常细胞进行繁殖。研究人员认为，如果没有这种蛋白质，癌细胞呼吁不会繁殖，免疫系...
治疗淋巴瘤 PI3K双重剂3期临床积极
CLL和SLL是影响相同淋巴细胞的癌症。它们本质上是相同的疾病，唯一不同的是癌症发生的。当大多数癌细胞都位于血液和骨髓时，这种疾病被称为CLL。而当癌细胞大多位于淋巴结时，它被称为SLL。根据美国国家癌症研究所的数据，在美国每年大约有19000人被诊断为CLL/SLL。平均每个人在一生中有0.6%的风险罹患CLL/SLL。这种疾病在40岁以下的人群中罕见，诊断时的平均年龄为71岁。...
免疫细胞检测技术：流式细胞仪检测凋亡：PI单染色法
由于凋亡细胞核的改变,造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变.研究表明,用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色,其DNA可染性降低.许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一....
实验动物基础：豚鼠在生物学研究中的应用
豚鼠对多种病原体,是用于病原的分离、鉴别、诊断,尤其对结核杆菌高度,感染后的病变酷似人类的病变,是结核杆菌的分离、鉴别、诊断以及病理研究的首选动物....
实验动物基础：犬的常见传染病
狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属,RNA型.病畜及带毒的野生动物是本病的传染病.病毒主要存在于病畜的唾液内,在临床症状出现前10-15天,以及临床症状消失后6-7天,唾液中均含有病毒.主要通过咬伤的伤口发生感染.现代研究,也可经消化道和呼吸道发生感染.据报道,蝙蝠的唾液带有病毒,因此认为蝙蝠在狂犬病的方面起着重要的作用.犬、猫以及其它各种家畜、家禽和野生动物对本病都易感染.实验动物中,家兔、豚鼠、小鼠等也能感染.人有较高的易感性.本病发生多由咬伤引起,所以链锁特别明显,以一个接着一个的顺序呈散发形式发...
细胞培养：动物细胞融合
2. 试剂 50%聚乙二醇(PEG)：称取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度试管，在酒精灯火或沸水中加热溶化。待冷至50℃时，加入等体积并预热至50℃的GKN 液混匀。...
增加PCR性：引物设计、退火温度、递减PCR、引物浓度等
① 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。...
蛋白表达：含多个磷酸化位点的多肽的合成
磷酸化多肽(主要指肽链中的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基的侧链羟基被磷酸化生成酸式磷酸酯的修饰多肽)是研究蛋白质磷酸化过程的必不可少的工具，它可作为磷酸酶模型底物，或作为可产生抗磷酸化蛋白抗体的抗原，也可以在确定磷酸化蛋白的物理参数时作为参考化合物等[3]。因此磷酸化多肽的合成在过去的几年中吸引了相当大的兴趣，目前已确定了较为成熟的合成线，使磷酸化多肽的合成趋于常规。目前磷酸化多肽的合成主要有两个策略：后磷酸化法(Global phosphorylation)和单体法(Building block appro...
蛋白表达：腺病毒系统重组技术
1. 提高了病毒的滴度.一次大规模扩增,纯化得到的病毒量可以满足上百只裸鼠实验或几十只大鼠实验....
DNA提取与纯化：质粒抽提的8大窍门
近20年来,在学术文献中报道新的纯化方法的文章几乎每周发布一篇,尽管这些方法的优点已被他们的发明者所,但极少有方法被广泛接受.实际上,许多新方法只是在旧方法的基础上做了少许改进或修改.一般来说,这些初始的旧方法已相当令人呢满意,并且仍有广泛的用途....
质粒提取：质粒DNA的纯化
近20年来,在学术文献中报道新的纯化方法的文章几乎每周发布一篇,尽管这些方法的优点已被他们的发明者所,但极少有方法被广泛接受.实际上,许多新方法只是在旧方法的基础上做了少许改进或修改.一般来说,这些初始的旧方法已相当令人呢满意,并且仍有广泛的用途....
免疫荧光：荧光抗体的制备
⑵ 搅拌法:①适用于蛋白质含量较高、样品体积较大的抗体溶液的标记; ②标记时间短、效率较高,荧光素用量节省;③影响因素多,非荧光较强...
免疫细胞检测技术：流式细胞仪检测凋亡：Heochst 33342PI双染色法
经固定的凋亡细胞其染色体荧光染料的DNA可染性性下降.细胞一经固定就不再是活细胞,而且细胞固定过程对细胞膜的通透性也有影响.因此发展了用 “细胞活性”鉴定染料染色的流式细胞仪检测方法.这些方法细胞不经固定就直接用DNA染料染色,且染料的浓度要比固定细胞所用的浓度要低得多.流式细胞仪通常根据细胞膜完整性将细胞分为“活细胞”和“死细胞”,因此正常细胞和凋亡细胞归为活细胞.活细胞染料如Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜而对细胞没有太大得细胞毒作用.Hoechst 33342在凋亡细胞中的荧光强度要比...
实验技能SOP：小鼠角叉菜胶性足肿模型制备标准操作规程
一、模型制备体重18～22 g的昆明种小鼠,♀♂不拘,随机分组,左后肢分别im 受试药、地塞米松 2 mg/kg或生理盐水(或溶媒),于给药后30 min时在每鼠右后足跖sc 1%角叉菜胶30 μl致炎.5 h后处死小鼠,从踝关节处对称剪下鼠足,称重,以左、右足重量差作为鼠足肿胀度....