实验动物基本参数:实验动物选择时应注意的问题

动物的体重与年龄有一定的关系,也可按体重推算年龄,例如昆明小鼠6 周龄时雄性约32g,雌性约28g;Wistar大鼠6周龄时雄性为180g,雌性约160g,豚鼠2月龄体重约400g,日本大耳白兔8月龄时体重约 4500g.应注意的是,动物体重除与年龄密切相关外,与动物品种、品系、营养状态、饲养管理等因素有关,不宜笼统对待....

细胞培养:激光显微细胞分离技术

然而,即使是最经典、可靠的检测方法,也不可避免混杂多种状态细胞中DNA、RNA或蛋白质的干扰,因此,需要发展组织显微分离技术,以解决从混合细胞型组织中分离某单一群的细胞.最开始,研究者从冰冻的组织块中粗略地挖取富含某一类细胞类群的组织,或用激光手工墨水标记的不需要部分,或手工工具针或刀机械地去除或刮取相应的组织.上述几种方法在操作过程中繁琐,不够精确,效率不能适应常规的临床诊断方法.为了解决上述问题,美国国立健康研究院肿瘤研究所病理研究室与生物医学设备组合作研发激光俘获显微切割技术,发展为Acturus...

细胞培养:鼠肝细胞原代培养方法

铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共 2 套,一套用于解剖取材,另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和 50 ml 的离心管,磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。...

PCR技术:PCR常见问题分析与对策

  3、假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高.引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列.靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性.需重新设计引物.靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或段的交叉污染,导致假阳性.这种假阳性可用以下方决:①操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外.②除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒.所用离心管及样进枪头等均应...

PCR技术:Taq DNA聚合酶

该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上) 或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成, 但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~...

蛋白提取:酪蛋白的提取

  酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零,同种电荷间的作用消失,溶解度很低,利用这一性质,经牛乳调到pH4.6,酪蛋白就从牛乳中分离出来.酪蛋白不溶于乙醇,这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去....

蛋白分离纯化:蛋白纯化常见问题

2) 请问有没有合成过配体为FMN的亲和胶? 亲和的填料合成过20来种,你是希望用它来纯化某种脱氢酶吗,我看FMN可偶联的有限,倒是FAD有活泼的氨基好偶联,何况它们几乎是同一个辅酶,你是不是考虑把FAD连上去.当然FMN的结构上也有个仲胺,可以偶联到带长手臂的环氧活化的填料上,而溴化氰活化或别的活化的介质都不大好,因此我觉得这个没有什么问题. 此外如果是以FMN为辅酶的,那我还可以你试试蓝色琼脂糖凝胶,因为它的配基的结构和FMN的三个环很相似,它能纯化不少脱氢酶和激酶.如果它可以你就不需要合成填料了,有...

上海生科院等设计出高效精确基因靶向整合的新策略

近日,《细胞研究》期刊在线发表了题为《运用CRISPR/Cas9 技术实现以同源臂介导的末端接合为基础的靶向整合》的研究论文,该研究由中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心杨辉研究组、基因编辑平台施霖宇团队与苏州灵长类研究平台孙强团队合作完成。该研究设计了一种以同源臂介导的末端接合(Homology-Mediated End Joining, HMEJ)为基础的基因敲入策略,它在很多种系统(体外培养的细胞、动物胚胎和体内组织)中比现有的基因敲入策略的效率都要高。基于更高效...

JCI:免疫细胞产生伤口愈合因子 有助开发肠病治疗新方法

  一些特定的免疫细胞能够产生愈合因子促进小肠进行伤口愈合,这一发现或有助于开发治疗炎症肠病的新治疗方法。美国乔治亚州立大学和密歇根大学的研究人员领导了该研究并将...

免疫检测分析:化学发光免疫与放射测定甲状腺激素的结果

放射免疫技术是目前较成熟及稳定的一种检测手段,具有灵敏度高、性强、抗体和抗原易于碘化标记,应用范围宽等特点;但使用放射性元素会有污染物处理问题,损害操作人员的身体健康.1977年,arakawa等基于放射免疫分析的基本原理,将酶的化学发光与免疫反应结合起来,发展了化学发光免疫分析方法[1].它是将发光物质或酶标记在抗原或抗体上,免疫反应结束后,加入氧化剂或酶底物而发光,通过测量发光强度,根据标准曲线测定待测物的浓度.clia 的主要优点是灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化...

实验动物基础:异常毒性试验标准操作规程(SOP)

3.1.1.2 胶塞、注射器及注射针,用水和蒸馏水冲洗干净后在蒸馏水中煮沸10分钟,取出,备用....

实验动物基本操作:成年猪胰岛分离纯化方法的优化

胰腺取回后,置于超净工作台上,快速去除胰周组织、脂肪、血管及外科被膜,保留固有被膜。从胰头、胰体交界部横断胰腺,找到主胰管,用20 G套管针插入,缝合线结扎,尾部远端亦结扎切断,每次均取约15-20 g组织,注入4℃含Ca2 Hanks液配制的复合胶原酶溶液(1.5 g/L,内含DNA酶0.3 g/L),注入量 = 胰质量×2,注射速度7 mL/min,3-4 min内完成,置入玻璃容器内,在38.5±0.1℃水浴中震荡消化,震速100 r/min,在消化过程中间断加入0.1 mmol/L的...

细胞培养:乳鼠心肌细胞培养

铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、眼科弯剪、玻璃培养皿(共 2 套,一套用于解剖取材,另一套用于剪碎心脏组织)、100 ml 广口瓶两个(分别装碘酒和酒精棉球)、500 ml 烧杯、250 ml 锥形瓶、15 ml和 50 ml 的离心管,磁力搅拌器和搅拌子(或者水浴振荡器)、150-200 目尼龙筛网和针式滤器。...

前沿科技 中科院上海生科院科学家在视网膜干细胞胚胎起源研究中取得进展

  在低等脊椎动物中,视网膜干细胞位于视网膜睫状边缘区中。在低等脊椎动物一生中,例如斑马鱼,视网膜能够不断增大。整个终生的视网膜生长就是通过视网膜干细胞的增殖和分化而实现的。在进化的过程中,更高等的脊椎动物,视网膜睫状边缘区细胞产生各种视网膜神经元的能力会更弱。但是越来越多的表明,在哺乳动物中,视网膜睫状边缘区细胞仍然具备产生新的神经元的潜能,只是在体内中,这些潜能被沉默了。其原因目前尚不清晰,这也是神经发育和再生领域一个重大命题。因此,更好地了解低等动物视网膜干细胞的微及其胚胎起源,将更有助于了解高等脊...

增加PCR的性:primers design 、stability of primers 、tmpature

a. 足够长18-24bp,以性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低性,并且降低产量...