PCR技术：反向PCR技术
通常测定一个与已知序列相邻的DNA序列是必要的，例如位于编码DNA的上游和下游两 侧的区域，转位因子的插入位点以及克隆于Lambda、科期粒或酵母人工染色体载体上 的DNA片段末段的未知序列的探针等。这种末端探针在Southern Blot或染色体步 查(Chromosome walking)所需的噬菌斑杂交或克隆杂交中都十分有用。...
蛋白分离纯化：现代生物分离技术在多肽蛋白质纯化中的应用
被分离对象——蛋白质等在40～50℃便不稳定,开始变性,而且绝大多数蛋白质都不溶于有机溶剂,若使蛋白质与有机溶剂接触,也会引起蛋白质的变性....
蛋白提取：蛋白质的提取技术
微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定.对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况：(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,...
聚焦ASCO丨迈出癌症早筛第一步：MSKCC联合Grail公司开发出首个高深度液态活检方法
MSKCC研究人员还表示，他们发现含有某个特定突变的癌症组织细胞所占比例和血浆中突变的检测能力间具有强相关性。换句话说，肿瘤早期的克隆突变要比后期形成的子克隆突变更容易在循环系统中检测到。...
质粒提取：质粒的制备
质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化.本实验以碱裂解法为例,介绍质粒的抽提过程....
基础免疫实验：溶血空斑试验
溶血空斑试验，又称空斑形成细胞(Plague Forming Cell，PFC)试验，是一种体外检测抗体形成细胞的方法。将一定量洗涤过的绵羊红细胞注射入小鼠腹腔，四天后将小鼠，取脾脏制成脾细胞悬液，内含抗体形成细胞。然后将脾细胞、绵羊红细胞，补体混合孵育。由于PFC 所分泌的抗体和绵羊红血球结合形成抗原抗体复合物，在补体作用下可使红细胞溶解，于特制的小室内形成可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。...
免疫细胞检测技术：流式细胞仪的使用流程
3、将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟.排出过滤器内的气泡....
实验动物基础：实验动物设施简介
由于安全保障方面的原因,动物室应是一个分开的部分.如果它与实验室毗连,则设计上应当同实验室的公共部分分开,并便于清除污染与杀灭虫害....
实验动物基础：大鼠药效试验实验
在本实验的剂量范围内受试动物未见活动减少、烦躁不安、食欲、两便异常等不良药物毒副反应现象,没有死亡....
液体活检技术有望成为新型癌症筛查手段
液体活检能够检测进入血液中的肿瘤DNA，如今研究者也用于对癌症患者进行监测，目前很多公司都开发出了多种癌症筛查手段，比如结肠镜检查术等;本文研究则表明，液体活检或有望成为癌症筛查的新型手段。研究者Dennis Lo博士表示，这项研究让我们非常激动，因为其帮我们制定了一张蓝图来更好地利用诸如肺癌或乳腺癌等癌症组织来开发新型的癌症筛查技术。...
科学家开发出能同时有效诊断淋巴瘤和黑色素瘤的新型检测技术
研究者表示，红外光谱法能检测由非霍奇金淋巴瘤和皮下黑色素瘤诱发的生化改变，这种技术有望作为一种新型的癌症筛查手段。目前多项研究发现，很多地区种人们患黑色素瘤的发病率不断上升，在过去10年里，浅肤色人群黑色素瘤的发病率从3%增加到了7%;此外，目前在美国非霍奇金淋巴瘤在所有癌症中占到了4.3%的比例，然而当前用于癌症诊断的策略包括组织检查和活检，这些手段非常耗时昂贵，且都是侵入性的操作。...
半定量RT-PCR 具体实验步骤？
RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆反应可以使用逆酶，以随机引物、oligo(dT)或基因性的引物（GSP）起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法RT-PCR中，逆和PCR在同时为逆和PCR优化的条件下，在一只管中顺次进行。...
PCR技术：浅谈PCR方法中常见的污染问题及对策
收集样品的容器最好使用一次性的,如重复使用,应在使用前应于180℃的高温下干烤6小时或更长时间;样品存放时要密封严实,以防外溢造成相互间的交叉污染;样品在提取过程中离心管及吸样枪头最好使用一次性的,以免不同实验样品间相互污染;由于吸样枪污染会导致样品间的污染,也是一个值得注意的问题,由于操作不慎将样品或提取物吸入移液枪内或粘上枪头是一个严重的污染源,因而加样或吸取时要十分小心,吸时要慢,吸取尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染;同时要注意操作时不要剧烈地摇动反应管,开盖时也容易造成...
蛋白分离纯化：酶的提取、分离、纯化及其活力测定
从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题,首先是细胞中含有许多种酶,每种酶的浓度又很低,只占细胞总蛋白质中的极小部分(叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外),而许多植物组织中蛋白质的含量又很低.此外,各种酶的存在状态不同,有在细胞外的外酶,在细胞内的内酶,内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶,也有的存在于细胞质中,提取时都应区别对待,作不同处理.如果酶仅存在于细胞质中,只要将细胞破碎,酶就会转移到提取液中;但如果是与细胞器(如细胞壁、细胞核、线粒体、原生质膜、微粒体等)紧密结合的酶,这时如仅仅破碎细胞还不够,还需...
Western-blot：Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变.以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的性目的基因表达的蛋白成分.该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达....