双酶切连接反应的经验
3、 双酶切时间及其体系：需要强调的是很多人酶切过夜，其实完全没有必要，一般酶切3个小时，对于PCR产物，可以过夜酶切，效果会很好。酶切体系不宜过大，会影响质粒和酶的碰撞机会，效果降低；质粒量不应该超过酶切要求的最大量，否则酶切不完全，酶的用量控制在1U酶在15-20ul体系中酶解1ugDNA。...
蛋白分离纯化：蛋白质纯化经验指南（5）
这是我的电泳图谱,第8条泳带的最下边就是我的目的蛋白带,我需要复性,这是一段杀菌蛋白,我要复性之后做抑菌圈.我用的pET-3C的载体,BL21表达...
蛋白表达：His-Tag原核表达――Qiagen
用基因工程的手段表达蛋白质,必需经过纯化才能实现最终目的.不同性质的蛋白质纯化条件各不相同太难摸索,这一点和核酸相差甚远,所以将目的蛋白和一个亲和纯化标签融合表达,通过亲和纯化Tag蛋白来纯化目的蛋白,就成为常用的迂回手段.大的Tag最后要经过切割得到目的蛋白,而His-Tag,这个只有6个组氨酸大小的标签在pH8.0时不带电,很小,几乎没有什么免疫原性,经多种融合蛋白验证对蛋白的分泌、折叠和结构,甚至功能几乎没影响,可以放在C端或者N端,更重要的是能够高度亲和Ni离子――而固化金属离子亲和层析已经相...
科学家发现：2 型糖尿病治疗新方向
全球有近 4 亿人患有 2 型糖尿病，而这一数字预计在未来几十年将会急剧增加。肥胖是这个问题日益严重的主要原因，白色脂肪组织是预防 2 型糖尿病发展的第一道防线。一个健康的白色脂肪组织可以储存脂肪，从而防止其他关键代谢器官 (如肝脏和骨骼肌) 过量脂肪堆积的有害影响。这将导致炎症和胰岛素功能的失调，从而促进从血液到组织的葡萄糖摄取。...
瘫痪小鼠在接受干细胞移植之后恢复知觉
脊椎损伤往往会导致瘫痪的发生，而到目前为止脊椎的移植仍是挑战性巨大的手术。最近，来自以色列的Shulamit Levenberg博士等人将人源的干细胞移植入大鼠受损脊椎中，这些干细胞是由口腔黏膜上皮的细胞去分化形成的，它能够分化形成支持性细胞，并且通过分泌因子促进神经元的生长与存活。...
免疫检测分析：放射免疫分析中造成测量误差的可能因素
二、试剂的纯度、质量和稳定性的影响也是造成误差的重要因素.如标记抗原的比度、纯度,辐射自分解,抗体的稳定性,分离剂、阻断剂及缓冲液等试剂的纯度等....
基础免疫实验：协同凝集实验
CoWan1株葡萄球菌接种于柯氏瓶,37℃培养18-24小时,用PBS洗下菌苔,每分钟2500转速度离心20分钟.沉淀菌用PBS洗两次后,用0.5%甲醛(用PBS配置)在室温中固定3小时.置于80℃水浴中4分钟以菌体的自源性分解酶.再用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液;...
实验动物模型：海人酸海马注射致大鼠颞叶癫痫模型
(2)脑电图检查 模型建立后6h,电脑记录的情况为海马的丛集性棘波放电,嗅球、纹状体和大脑皮层未记录到棘波放电.建立后1d,除了海马存在棘波放电外,纹状体和大脑皮层也可记录到稀少的与海马棘波同步的棘波放电;建立3d,除了海马密集的癫痫波外,纹状体和大脑皮层的棘波逐渐增多,同时,在嗅球可记录到癫痫波,这些海马记录到的癫痫波与海马的棘波具有同步性.模型建立后5d至2个月,在癫痫大鼠的海马、纹状体、大脑皮层和嗅球均可记录到较多的癫痫波....
实验动物解剖：大鼠解剖学特点
2. 大鼠骨骼约105-108块,大鼠的生长发育期长,长骨长期有骨骺存在,不骨化.切齿终生不断生长,大鼠需不断啃咬磨牙以维持其长度恒定,故垫料中应有部分小木块供其啃咬....
NK细胞纯因子培养技术强势来袭，NK细胞层培养技术，前何在？
NK细胞培养吸引了众多目光。培养技术一直有两种：一种是便宜的层培养技术，一种是昂贵的纯因子培养技术。两种培养技术各有粉丝，原本相安无事，但在举办的2017（第八届）细胞治疗国...
BMC Complem Altern M：来自葡萄的化合物可结肠癌干细胞
2017年6月21日，根据美国癌症学会的说法，在美国，结直肠癌是癌症相关死亡的第二大原因。根据一项新的研究，来自葡萄的化合物可能能够培养皿中和小鼠体内的结肠癌干细胞。这些...
影响PCR的主要因素
在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例所示，其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s，共25～30个循环，扩增片段500bp。在这里，每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算。在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30～60s，这一迟滞时间的长短取决于几个因素，包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差，在设置热循环时应充分给以重视和考虑，对每一仪器均应进行实测。...
PCR技术：PCR-SSCP的发展现状
日本Orita等研究发现，单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由 其内部碱基配对等内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或 少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链DNA在聚丙烯酰 胺凝胶中受排阻大小不同.因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，可以非常 敏锐地将构象上有差异的分离开.作者称该方法为单链构象多态性 (Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP)分析.在随后的研究中，作者又 将SSCP用于检...
基础知识：蛋白质化学思考题总汇
①目前基因注释的方法还有较高的出错率，尤其对那些存在不连续基因(即在基因内插有非编码的核苷酸序列)的复杂基因组。②假基因 (pseudogene)的存在，这些假基因有和真基因相同的ORF，但却从不表达(已发现表达的假基因)③RNA水平上遗传信息加工(RNA editing)④蛋白质水平上遗传信息的加工(蛋白质剪接...
2D电泳技术：蛋白质双向电泳过程与体会
BIO-RAD 的圆盘电泳槽,国产的不推荐,因为 上槽 Biorad 的铂金丝凹进去了一点,不是很进去,而国产的凹得太进去了以至于电聚焦时产生的气泡绕在铂金丝一圈,影响电聚焦....